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關于桿狀病毒表達系統(tǒng)的一些問題？ 已有1人參與
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關于桿狀病毒表達系統(tǒng)的一些問題？ 1.如果我不測滴度的話，按照理論P3滴度是不是大于1X108了，那么我表達蛋白的時候能不能就按照1X108，MOI值5 來計算病毒加入的量，這樣對表達量影響大么？ 2.收菌的時間是48-72h,72h的時候已經(jīng)有一些細胞破碎了，細胞活力在70-80%，我看手冊上說，“Harvest the virus when 70–80% of cells are dead”是不是說收獲的時候細胞活力只有20%，那豈不是很多細胞都破碎了，蛋白不就被降解了么？文獻又有說細胞活力在90%的時候收，所以我就很困惑，什么時間收比較好 3.表達后，菌液高壓破碎后特別稠，堵柱子，流過液中也有目的蛋白（帶6個His-tag），感覺不掛柱，純化的時候洗了好多梯度，蛋白還是很雜。 小白入門，求大神指點 |
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3樓2018-08-20 11:36:42
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4樓2018-08-21 19:40:59
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