 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 3 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1222 | 回復: 2 | |||
[交流]
白細胞介素8蛋白表達純化及其與腫瘤的關(guān)系 已有2人參與
|
|
白細胞介素是一類分子結(jié)構(gòu)和生物學功能已基本明確，并具備調(diào)節(jié)作用的細胞因子。按照其發(fā)現(xiàn)順序給予序號，目前已經(jīng)命名38種（IL-1～IL-38）。IL-8屬于其中一組小的分泌型炎癥性細胞因子，IL-8蛋白表達純化可為其進一步的理論研究和大批量生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。研究發(fā)現(xiàn)IL-8 不僅可以促進腫瘤細胞轉(zhuǎn)移，更是預示癌癥患者不良預后的細胞因子，靶向 IL-8 信號通路的藥物有望成為防治腫瘤轉(zhuǎn)移的抗癌新藥。 1、白細胞介素8蛋白表達純化與活性檢測 白細胞介素—8 (Interleukin-8, IL-8)是一種多功能性的細胞因子，屬于趨化因子CXC亞家族的一員，是體內(nèi)炎癥反應(yīng)應(yīng)答的主要介質(zhì)之一。除常規(guī)生化檢測方法之外，可利用基因工程技術(shù)實現(xiàn)重組人源性IL-8蛋白表達純化，并利用PCA技術(shù)實現(xiàn)重組IL-8活性檢測。美迪西生物醫(yī)藥是一家醫(yī)藥研發(fā)外包公司，在重組蛋白表達與純化服務(wù)方面經(jīng)驗豐富，其擁有多種蛋白表達系統(tǒng)，包括原核蛋白表達系統(tǒng)、酵母蛋白表達系統(tǒng)、昆蟲細胞蛋白表達系統(tǒng)（桿狀病毒）哺乳動物細胞蛋白表達系統(tǒng)。 將3種不同亞型的重組人IL-8基因片段分別與表達載體pME-15-6His和pET-32a連接，轉(zhuǎn)入哺乳動物細胞HEK 293F和大腸桿菌BL2l(DE3)，進行IL-8的表達。采用IMAC親和層析柱對重組人IL-8進行純化。根據(jù)PCA技術(shù)，構(gòu)建了Split-TEV GPCR激活檢測系統(tǒng)，對純化的目的蛋白進行了細胞內(nèi)生物學活性檢測。結(jié)果成功構(gòu)建了真核表達載體pME-15-6His/IL-8formI，前體IL-8基因在HEK293F中正確分泌表達，其N端信號肽(殘基1-20)被切除，經(jīng)過純化得到的重組蛋白為成熟的IL-8 form I(殘基21-99)；成功構(gòu)建了原核表達載體pET-32a/IL-8 formII和pET-32a/IL-8 form III，N端融合了Trx標簽的重組蛋白在大腸桿菌中正確表達，經(jīng)過純化和重組腸激酶酶切得到的重組蛋白為IL-8 form II(殘基23-99)和IL-8form III(殘基28-99)。純化后的重組人IL-8對其天然受體IL8RB具有明顯的激活活性，其ECso值分別為：12.32ng/ml (Form Ⅰ)、15.14 ng/ml (Form Ⅱ)和2.85ng/ml (Form Ⅲ)。 成功構(gòu)建、表達和純化了具有生物學活性的3種不同亞型的重組人IL-8，為進一步的理論研究和大批量生產(chǎn)奠定了基礎(chǔ)。研究表明IL-8在調(diào)節(jié)細胞生長與分化、炎性反應(yīng)、免疫應(yīng)答、機體防御損傷及修復等過程中起著重要作用，也有研究發(fā)現(xiàn)，IL-8在腫瘤發(fā)生發(fā)展中也發(fā)揮重要作用。 2、白細胞介素8與腫瘤的關(guān)系 （1）白細胞介素8的表達與腫瘤的關(guān)系 趨化因子IL-8的表達可分為組成型和誘導型。研究發(fā)現(xiàn)，IL-8的組成型表達與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。通過實驗發(fā)現(xiàn)晚期結(jié)腸癌患者血清IL-8表達水平較健康對照高10倍，IL-8高表達不僅與腫瘤臨床分期相關(guān)聯(lián)，而且與化療初不良反應(yīng)、腸壁浸潤及肝臟轉(zhuǎn)移亦相關(guān)聯(lián)。 （2）白細胞介素8與腫瘤易感性的關(guān)系 易感性指在相同環(huán)境下，由遺傳基礎(chǔ)所主導的不同個體患病的風險。隨著對腫瘤研究的不斷深入，易感性的研究在腫瘤中占據(jù)越來越重要位置，并成為研究的一個重要課題。作為腫瘤微調(diào)節(jié)器，IL-8不僅表現(xiàn)為腫瘤中表達水平的變化，而且與腫瘤如胃癌、食管癌、肺癌、口腔癌等易感性相關(guān)聯(lián)。研究結(jié)果表明IL-8-251A/T單核苷酸多態(tài)性與腫瘤的易感性相關(guān)，為深入探究IL-8與腫瘤的關(guān)系做好鋪墊，為腫瘤的治療提供新的途徑。 （3）IL-8與腫瘤血管生長的關(guān)系 腫瘤生長的血管依賴性理論指的是腫瘤的發(fā)展演進除與其自身細胞增殖有關(guān)外，更需要其周圍血管提供豐富的營養(yǎng)支持。這一里程碑理論的提出為腫瘤的研究開拓了一個新的研究領(lǐng)域，通過阻斷血管的生成，就有可能抑制腫瘤細胞生長，進而抑制腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移和復發(fā)。經(jīng)過幾十年的探索，發(fā)現(xiàn)多種細胞因子均與血管生成密切相關(guān)，如VEGF家族、表皮生成因子（EGF）、血管生成素家族、FGF家族、轉(zhuǎn)化生長因子以及趨化因子家族等，其中趨化因子IL-8是近年來研究的熱點。研究者發(fā)現(xiàn)IL-8能以自分泌和旁分泌形式上調(diào)IL-8、膠原酶Ⅳ、VEGF、EGFR和下調(diào)E-鈣黏蛋白在腫瘤細胞內(nèi)的表達以及增加MMP-9的活性和侵襲力直接或間接調(diào)控腫瘤血管的生長。還有研究者發(fā)先IL-8還可通過抑制內(nèi)皮細胞的自發(fā)性凋亡而調(diào)節(jié)腫瘤血管的生長，進一步證實IL-8與腫瘤血管生長的密切關(guān)系。 （4）IL-8與腫瘤演進的關(guān)系 腫瘤演進指腫瘤惡性程度逐步增高的過程，包括生長速度加快、浸潤周圍組織并發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）是癌細胞侵襲和轉(zhuǎn)移的細胞學基礎(chǔ)，而E-cadherin、β-catenin的變化是EMT的特征性標志，研究者應(yīng)用免疫組化的方法，對肝細胞肝癌患者石蠟組織切片標本中IL-8、β-catenin、E-cadherin、MMP-9等指標進行檢測，結(jié)果顯示，IL-8與β-catenin、MMP-9的表達呈正相關(guān)，與E-cadherin的表達呈負相關(guān)。IL-8高表達標本中β-catenin、 MMP-9的表達相應(yīng)增加，E-cadherin的表達則出現(xiàn)降低。 （5）IL-8與腫瘤耐藥性的關(guān)系 隨著化療藥物的廣泛使用，腫瘤的耐藥問題日益突出。最近的研究發(fā)現(xiàn)耐藥的多種腫瘤（如肺癌、胃癌、乳腺癌、膀胱癌等）中IL-8的表達水平均有不同程度升高。研究者以四種上皮性卵巢癌細胞為實驗對象，多途徑研究IL-8與卵巢癌細胞的耐藥性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，卵巢癌細胞的耐藥性與IL-8對耐藥相關(guān)基因（MDR1、MRP、LRP、GST-P、Topo-N）以及凋亡相關(guān)基因（Bc-l2、Bc-lxL、Mc-l1、XIAP）的調(diào)控有關(guān)，進行深入研究發(fā)現(xiàn)該調(diào)控作用具有劑量依賴性。IL-8表達水平高的卵巢癌細胞，耐藥相關(guān)基因以及凋亡相關(guān)基因的表達也相應(yīng)增高，使化療藥物產(chǎn)生的凋亡信號成為無效信號，細胞凋亡減少，最終導致卵巢癌細胞對順鉑和紫杉醇的敏感性降低。 IL-8在惡性腫瘤中的高表達與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，不僅影響腫瘤血管的生成，而且能促進腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移到周圍淋巴結(jié)以及轉(zhuǎn)移到周圍組織肝和肺等。通過血清、血漿、細胞上清液以及組織勻漿中IL-8的檢測，可能為惡性腫瘤的早期診斷提供幫助。干擾或下調(diào)IL-8的表達，阻礙其功能的發(fā)揮，進而抑制腫瘤發(fā)展演進、延緩病程進展，以期為惡性腫瘤的靶向治療提供新的思路。 |
回復此樓» 猜你喜歡
考研調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復
-
317分 一志愿南理工材料工程 本科湖工大 求調(diào)劑
已經(jīng)有9人回復
-
297求調(diào)劑
已經(jīng)有10人回復
-
一志愿武漢理工，總分321，英一數(shù)二，求老師收留。
已經(jīng)有10人回復
-
343求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復
-
085601材料工程找調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復
-
求調(diào)劑，一志愿 南京航空航天大學 ，080500材料科學與工程學碩，總分289分
已經(jīng)有6人回復
-
一志愿南航 335分 | 0856 | GPA 4.07 | 有科研經(jīng)歷
已經(jīng)有5人回復
-
340求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復
-
一志愿北化求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
2樓2018-08-23 16:51:12
546516632
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 332.4
- 帖子: 107
- 在線: 31.6小時
- 蟲號: 2074370
- 注冊: 2012-10-20
- 性別: GG
- 專業(yè): 基因表達調(diào)控與表觀遺傳學
3樓2018-08-25 14:51:37
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 medicilon 的主題更新
| 3 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 348求調(diào)劑 +5 | 小懶蟲不懶了 2026-03-28 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿北京化工大學材料與化工（085600）296求調(diào)劑 +13 | 稻妻小編 2026-03-26 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 一志愿太原理工安全工程300分，求調(diào)劑 +5 | 0857求調(diào)劑. 2026-03-24 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +7 | 爭取九點睡 2026-03-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +15 | hhhhxn.. 2026-03-23 | 21/1050 |
|
|
|
[考研] 0703化學/290求調(diào)劑/本科經(jīng)歷豐富/工科也可 +9 | 丹青奶蓋 2026-03-26 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 340求調(diào)劑 +5 | jhx777 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 285求調(diào)劑 +4 | AZMK 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿南師大0703化學 275求調(diào)劑 +4 | Ripcord上岸 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 287求調(diào)劑 +10 | land xuxu 2026-03-26 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 322求調(diào)劑 +4 | 我真的很想學習 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[碩博家園] 北京林業(yè)大學碩導招生廣告 +6 | kongweilin 2026-03-26 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 359求調(diào)劑 +4 | 王了個楠 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +4 | 柚柚yoyo 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 290分調(diào)劑求助 +3 | 吉祥止止陳 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 26考研-291分-廈門大學（085601）-柔性電子學院材料工程專業(yè)求調(diào)劑 +3 | min3 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 網(wǎng)絡(luò)空間安全0839招調(diào)劑 +4 | w320357296 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 生物學學碩求調(diào)劑 +7 | 小羊睡著了? 2026-03-23 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 化工專碩求調(diào)劑 +3 | question挽風 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿吉大化學322求調(diào)劑 +4 | 17501029541 2026-03-23 | 6/300 |
|