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weizhi111至尊木蟲 (正式寫手)
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[求助]
COIP實(shí)驗(yàn)求教 已有1人參與
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做兩個(gè)蛋白在體內(nèi)互作co-IP實(shí)驗(yàn)，A能拉下B，但B拉不下A，是怎么回事呢？ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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weizhi111
至尊木蟲 (正式寫手)
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2樓2018-11-05 07:57:37
梅雪芳
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同樣在做COIP，個(gè)人認(rèn)為你只要一個(gè)方向拉下來(lái)就行了吧？反方向會(huì)不會(huì)是因?yàn)锽所結(jié)合的其他蛋白成分比較多，掩蓋了A成分？ 我們這邊想做某個(gè)雜蛋白ESP與細(xì)胞中的蛋白DNMT/TET的相互作用，想知道這個(gè)雜蛋白ESP中的哪些成分能與細(xì)胞中的蛋白DNMT/TET相互作用，用COIP-MS的方法。 目前的做法是，做了雜蛋白ESP的多克隆抗體（兔IgG），買了蛋白DNMT/TET的商品化抗體。將雜蛋白ESP與細(xì)胞作用48h后，做coip。洗脫后，用雜蛋白ESP的多克隆抗體做WB驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)沒有特異性條帶，也就是沒拉下來(lái)，但是其他的實(shí)驗(yàn)又間接證明他們之間應(yīng)該有關(guān)系。 請(qǐng)問這種情況會(huì)是什么問題呢？原代細(xì)胞？雜蛋白多抗的問題？蛋白與細(xì)胞作用時(shí)間太長(zhǎng)了？ 還是說根本就沒有結(jié)合？ 這種情況有沒有什么解決方案，或者應(yīng)該用什么方法驗(yàn)證一下呢？ 以下是兩次COIP的結(jié)果，沒有看到特異性條帶 |
3樓2018-11-19 22:57:38
4樓2018-12-12 22:05:13
prthefu
木蟲 (著名寫手)
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5樓2019-01-03 11:21:58
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