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weizhi111至尊木蟲 (正式寫手)
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[求助]
COIP實驗求教 已有1人參與
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做兩個蛋白在體內(nèi)互作co-IP實驗，A能拉下B，但B拉不下A，是怎么回事呢？ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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梅雪芳
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同樣在做COIP，個人認為你只要一個方向拉下來就行了吧？反方向會不會是因為B所結(jié)合的其他蛋白成分比較多，掩蓋了A成分？ 我們這邊想做某個雜蛋白ESP與細胞中的蛋白DNMT/TET的相互作用，想知道這個雜蛋白ESP中的哪些成分能與細胞中的蛋白DNMT/TET相互作用，用COIP-MS的方法。 目前的做法是，做了雜蛋白ESP的多克隆抗體（兔IgG），買了蛋白DNMT/TET的商品化抗體。將雜蛋白ESP與細胞作用48h后，做coip。洗脫后，用雜蛋白ESP的多克隆抗體做WB驗證，發(fā)現(xiàn)沒有特異性條帶，也就是沒拉下來，但是其他的實驗又間接證明他們之間應(yīng)該有關(guān)系。 請問這種情況會是什么問題呢？原代細胞？雜蛋白多抗的問題？蛋白與細胞作用時間太長了？ 還是說根本就沒有結(jié)合？ 這種情況有沒有什么解決方案，或者應(yīng)該用什么方法驗證一下呢？ 以下是兩次COIP的結(jié)果，沒有看到特異性條帶 |
3樓2018-11-19 22:57:38
weizhi111
至尊木蟲 (正式寫手)
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prthefu
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5樓2019-01-03 11:21:58
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