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| 【懸賞金幣】回答本帖問(wèn)題，作者董紅紅將贈(zèng)送您 49 個(gè)金幣 | ||
[求助]
pcambia1304植物表達(dá)載體構(gòu)建 已有1人參與
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最近打算構(gòu)建一些植物表達(dá)載體，用的載體是pcambia1304，遇到的問(wèn)題如下： 1插入的片段應(yīng)該是在多克隆位點(diǎn)處還是35S啟動(dòng)子后面？ 2.如果插入到多克隆位點(diǎn)的話基因沒(méi)有啟動(dòng)子，前面只有一個(gè)lac啟動(dòng)子和操縱子，這個(gè)基因能正常表達(dá)嗎？ 3.如果插在35S啟動(dòng)子后面，那么原先35S后面的GFP和GUS還能正常表達(dá)嗎？ 4。如果是自己在多克隆位點(diǎn)處引入基因的啟動(dòng)子，那加基因自身的啟動(dòng)子好還是加一個(gè)強(qiáng)啟動(dòng)子就可以？加什么啟動(dòng)子比較好？ 還請(qǐng)路過(guò)的大神指點(diǎn)，不甚感激 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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2樓2018-11-13 01:15:12
海闊天空_812
新蟲 (小有名氣)
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- 專業(yè): 遺傳學(xué)與生物信息學(xué)
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董紅紅(liouzhan654代發(fā)): 金幣+1, 感謝交流 2018-11-13 11:45:47
董紅紅(liouzhan654代發(fā)): 金幣+1, 感謝交流 2018-11-13 11:45:47
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應(yīng)該是35S啟動(dòng)子好一些，其次，多克隆位點(diǎn)前沒(méi)有35S的話基因不要插，要不然無(wú)法啟動(dòng)自己基因的表達(dá)，也就是不能融合表達(dá)。將自己的基因插在35S后，GUS基因前，要么改造載體，在多克隆位點(diǎn)前加35S啟動(dòng)子。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
3樓2018-11-13 01:19:39
4樓2018-11-13 07:46:43
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這個(gè)載體上本來(lái)已有2個(gè)35S啟動(dòng)子，如果再加一個(gè)的話，那就3個(gè)35S啟動(dòng)子了，這樣會(huì)不會(huì)后面測(cè)序的時(shí)候不好測(cè)？ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
5樓2018-11-13 18:29:55
6樓2018-11-13 18:39:44
夢(mèng)弋驚龍
鐵桿木蟲 (著名寫手)
***
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【答案】應(yīng)助回帖
| 該植物過(guò)表達(dá)質(zhì)粒，含有兩個(gè)35S啟動(dòng)子，一個(gè)是增強(qiáng)型35S，其主要目的就是在植物中增強(qiáng)目的基因的表達(dá)，另一個(gè)35S啟動(dòng)子的目的是啟動(dòng)GFP和GUS報(bào)告基因的，所以兩個(gè)35S啟動(dòng)子目的不同。片段要插入多克隆位點(diǎn)，該質(zhì)粒含有l(wèi)acZa，是可以進(jìn)行藍(lán)白斑篩選的。該質(zhì)粒在MCS上下游是含有M13通用引物序列的，可以使用M13測(cè)序！ |
7樓2019-03-01 18:59:26
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