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[求助]
pcambia1304植物表達(dá)載體構(gòu)建 已有1人參與
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最近打算構(gòu)建一些植物表達(dá)載體，用的載體是pcambia1304，遇到的問題如下： 1插入的片段應(yīng)該是在多克隆位點(diǎn)處還是35S啟動子后面？ 2.如果插入到多克隆位點(diǎn)的話基因沒有啟動子，前面只有一個(gè)lac啟動子和操縱子，這個(gè)基因能正常表達(dá)嗎？ 3.如果插在35S啟動子后面，那么原先35S后面的GFP和GUS還能正常表達(dá)嗎？ 4。如果是自己在多克隆位點(diǎn)處引入基因的啟動子，那加基因自身的啟動子好還是加一個(gè)強(qiáng)啟動子就可以？加什么啟動子比較好？ 還請路過的大神指點(diǎn)，不甚感激 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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還有一個(gè)問題，這個(gè)載體上有兩個(gè)35S啟動子，測序時(shí)沒法用35S的通用引物，請問做過的大神們一般用什么引物測序呀？ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
2樓2018-11-13 01:15:12
海闊天空_812
新蟲 (小有名氣)
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董紅紅(liouzhan654代發(fā)): 金幣+1, 感謝交流 2018-11-13 11:45:47
董紅紅(liouzhan654代發(fā)): 金幣+1, 感謝交流 2018-11-13 11:45:47
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應(yīng)該是35S啟動子好一些，其次，多克隆位點(diǎn)前沒有35S的話基因不要插，要不然無法啟動自己基因的表達(dá)，也就是不能融合表達(dá)。將自己的基因插在35S后，GUS基因前，要么改造載體，在多克隆位點(diǎn)前加35S啟動子。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
3樓2018-11-13 01:19:39
4樓2018-11-13 07:46:43
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這個(gè)載體上本來已有2個(gè)35S啟動子，如果再加一個(gè)的話，那就3個(gè)35S啟動子了，這樣會不會后面測序的時(shí)候不好測？ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
5樓2018-11-13 18:29:55
6樓2018-11-13 18:39:44
夢弋驚龍
鐵桿木蟲 (著名寫手)
***
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7樓2019-03-01 18:59:26
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