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二甲雙胍體外抗宮頸癌細(xì)胞增殖作用研究及二甲雙胍的不良反應(yīng)
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根據(jù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究發(fā)現(xiàn)，二甲雙胍具有治療宮頸癌的作用，但其作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)服務(wù)一般可以提供細(xì)胞凋亡、細(xì)胞活力檢測(cè)、細(xì)胞增殖等服務(wù)，體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究表明二甲雙胍對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞的增殖抑制作用。 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)服務(wù)可以為科研人員提供科學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)咨詢和研發(fā)服務(wù)，共享實(shí)驗(yàn)資源，解決實(shí)驗(yàn)難題。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)服務(wù)常采用的方法有MTT比色法，它是常用的檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法之一。 MTT全稱為3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide，其檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT 還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜能溶解細(xì)胞中的甲瓚，用酶標(biāo)儀在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值，在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，甲瓚結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比，因此490nm波長(zhǎng)處的吸光值可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。該方法已廣泛用于抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測(cè)定等。 上海美迪西的生物部在分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、體外生物學(xué)和結(jié)構(gòu)生物學(xué)領(lǐng)域有豐富廣泛的經(jīng)驗(yàn)。從最初的cDNA文庫構(gòu)建到藥物設(shè)計(jì)，通過蛋白質(zhì)純化，結(jié)構(gòu)測(cè)定和分析測(cè)定，提供一套完整的生物學(xué)服務(wù)。 對(duì)二甲雙胍的抗腫瘤作用研究表明，存在一個(gè)生物學(xué)機(jī)制通過AMPK(磷酸腺苷活化蛋白激酶)激活和一直胰島素信號(hào)，來介導(dǎo)二甲雙胍的抗癌作用。目前認(rèn)為二甲雙胍主要通過抑制哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子3蛋白合成、人類腫瘤髓細(xì)胞白血病蛋白表達(dá)和降低循環(huán)中胰島素/胰島素生長(zhǎng)樣因子水平等多種途徑，抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、增殖和侵襲轉(zhuǎn)移，實(shí)現(xiàn)對(duì)宮頸癌的治療作用。除此之外，二甲雙胍還可能具有使放化療增敏的作用。 1、MTT法檢測(cè)二甲雙胍對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞增殖作用研究 MTT法檢測(cè)常包含在一些公司提供的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)服務(wù)中。將宮頸癌Hela細(xì)胞分為空白對(duì)照組、不同濃度(0.01、0.5、1、5、10、20mmol/L)二甲雙胍組，采用MTT法檢測(cè)不同濃度二甲雙胍對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞的增殖活性的影響；并應(yīng)用AO/EB染色和流式細(xì)胞儀研究二甲雙胍的體外抗腫瘤機(jī)制。 將1.0mmol/L及5.0mmol/L的二甲雙胍與25mg/L、50mg/L的卡鉑單一或聯(lián)合作用宮頸癌Hela細(xì)胞，采用MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞OD值，計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率。結(jié)果二甲雙胍對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞體外增殖能力有明顯的抑制作用，且呈明顯的濃度依賴性和時(shí)間依賴性；與對(duì)照組比較，熒光顯微鏡下計(jì)數(shù)發(fā)現(xiàn)不同濃度二甲雙胍作用宮頸癌Hela細(xì)胞24h后，隨著二甲雙胍濃度的增加，細(xì)胞凋亡率逐漸升高(P<0.05)，而以不同濃度(0、1、5mmol/L)二甲雙胍培養(yǎng)宮頸癌Hela細(xì)胞48h后，流式細(xì)胞儀檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組Hela細(xì)胞處于G0/G1期比例升高，S期細(xì)胞比例下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 二甲雙胍聯(lián)合卡鉑對(duì)抑制宮頸癌Hela細(xì)胞增殖具有協(xié)同作用，且隨著二甲雙胍濃度的增加，細(xì)胞增殖抑制率增加(P<0.05)。結(jié)論證實(shí)二甲雙胍對(duì)體外宮頸癌Hela細(xì)胞增殖有明顯的抑制作用，它是通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期G0/G1期阻滯來實(shí)現(xiàn)的；二甲雙胍與卡鉑聯(lián)合應(yīng)用能夠增強(qiáng)卡鉑對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞的增殖抑制作用。然而二甲雙胍不能亂用，它具有以下5種不良反應(yīng)和危害，解決不好，后果真的很嚴(yán)重。 2、二甲雙胍的副作用 （1）帶來的胃腸道疾病 二甲雙胍最常見的不良癥狀是胃腸道的反應(yīng)，癥狀有腹瀉、腹痛、厭食、惡心、嘔吐、胃脹、腹部不適、消化不良等。個(gè)別患者應(yīng)用后口中有金屬味，極個(gè)別會(huì)出現(xiàn)消化性潰瘍，胃、十二指腸球部炎癥。 因此，不在空腹或飯前服用二甲雙胍，應(yīng)該在進(jìn)餐過程中服用。剛開始服用二甲雙胍的糖友，可以在第一周的晚餐時(shí)服用一次藥物。因?yàn)檫@些不良反應(yīng)常常與劑量有關(guān)，所以應(yīng)從小劑量（500毫克/天）開始使用，再逐漸增加劑量，以使胃腸道慢慢適應(yīng)。每日用量最好不要超過2克。可以考慮使用特殊劑型，如腸溶片、緩釋片，這些劑型比起普通劑型來說，引起的胃腸道不良反應(yīng)更少。 （2）引起乳酸酸中毒 相對(duì)于苯乙雙胍，二甲雙胍引起乳酸酸中毒的風(fēng)險(xiǎn)極小，但當(dāng)合并合并應(yīng)用非甾體類抗炎藥與利尿劑可增加乳酸酸中毒的風(fēng)險(xiǎn)。因此二甲雙胍合并用其他藥物一定要在醫(yī)生的指導(dǎo)下進(jìn)行，一旦出現(xiàn)中毒癥狀一定要及時(shí)就醫(yī)，并說明服藥情況。 （3）引起皮膚損害及過敏反應(yīng) 二甲雙胍可引起皮膚瘙癢、皮疹、多形性紅斑、水泡等。也曾經(jīng)有剝脫性皮炎、脫發(fā)等全身皮損的報(bào)道，但罕見。一般癥狀較輕時(shí)停藥后可自愈，若出現(xiàn)皮損應(yīng)采取相應(yīng)的處理措施，嚴(yán)重過敏反應(yīng)導(dǎo)致過敏性休克者極為罕見。 （4）引起低血糖癥狀 單獨(dú)使用二甲雙胍通常不引起低血糖，但在應(yīng)用二甲雙胍時(shí)如果有劇烈運(yùn)動(dòng)、大量飲酒或空腹飲酒、進(jìn)食量不足時(shí)有可能發(fā)生；與其他抗糖尿病藥物或胰島素聯(lián)合使用時(shí)增加低血糖的風(fēng)險(xiǎn)。因此服用二甲雙胍時(shí)應(yīng)戒酒；保證足夠的進(jìn)食量；劇烈運(yùn)動(dòng)后不要立即服用二甲雙胍。 （5）血液系統(tǒng)的異常 個(gè)別患者長(zhǎng)期應(yīng)用二甲雙胍有可能減少維生素B12的吸收，有可能對(duì)血液系統(tǒng)產(chǎn)生不良影響，出現(xiàn)巨幼紅細(xì)胞性貧血，但罕見。出現(xiàn)這種情況比較罕見，所以，必要時(shí)可檢查血象。 其實(shí)，相對(duì)于很多藥物來說，二甲雙胍安全性是良好的，二甲雙胍在2型糖尿病的治療中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。其他研究也表明二甲雙胍在多種癌癥中都具有抗腫瘤作用，包括乳腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌和卵巢癌。臨床和實(shí)驗(yàn)室研究也表明，二甲雙胍可以提高病人對(duì)化療的反應(yīng)。目前的研究來看，二甲雙胍使用者對(duì)化療的反應(yīng)最好。因此二甲雙胍逾半個(gè)世紀(jì)的應(yīng)用是積累了大量的經(jīng)驗(yàn)，其作為一線用藥的地位至今未能撼動(dòng)。 |
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