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有養(yǎng)KG-1和THP-1細(xì)胞的嗎？ 已有2人參與
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有養(yǎng)過KG-1和THP-1細(xì)胞的嗎？這兩株細(xì)胞培養(yǎng)條件是不是很苛刻？ 可否交流一下？ |
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http://cache.baidu.com/c?m=9f65c ... 650dbd8cdb&p1=4 生物秀論壇>細(xì)胞實(shí)驗(yàn)技術(shù)>如何養(yǎng)好THP-1細(xì)胞 發(fā)表于 2007-10-29 13:57 請教 如何養(yǎng)好THP-1細(xì)胞 從上海生命科學(xué)研究所購買的 開始還可以 過了一段時間就不行了，急急急�。�！ 【獨(dú)狼 生物秀探花 積分15311帖子982】發(fā)表于 2007-10-29 15:01 THP-1 細(xì)胞是懸浮細(xì)胞，相對貼壁細(xì)胞要求高一點(diǎn)。細(xì)胞養(yǎng)不好，可能的原因有，THP-1細(xì)胞特別依賴細(xì)胞濃度，ATCC上105到106每ML，是一個很高的密度，細(xì)胞少了就不太容易養(yǎng)好。 1、細(xì)胞株的來源很重要，如直接來源于ATCC（American Type Culture Collection 美國模式菌種保藏中心）生命力要強(qiáng)于國內(nèi)細(xì)胞庫的 2、注意細(xì)胞的密度一定要高，介于5×105 - 106/ML之間，增值的快。細(xì)胞數(shù)量太少，不適合THP-1生長，一般狀態(tài)不好的THP-1在培養(yǎng)了3天后數(shù)量仍然不多，繼續(xù)培養(yǎng)一天或者兩天，培養(yǎng)基嚴(yán)重泛黃，細(xì)胞數(shù)量會巨增。這一點(diǎn)不同于同是單核細(xì)胞系的U937細(xì)胞。 3、THP-1細(xì)胞適合在細(xì)胞ph環(huán)境偏酸環(huán)境生長，對培養(yǎng)基變化非常敏感，所以盡量使用相同ph的1640， 4、還要注意，傳代后切忌常移出培養(yǎng)箱觀察，否則會影響細(xì)胞生長，狀態(tài)變差，一般首先表現(xiàn)為細(xì)胞內(nèi)顆粒變多。一般THP-1生長相當(dāng)快，對于狀態(tài)已經(jīng)不好的情況，建議傳代后3～4天再觀察，一般4天時間培養(yǎng)基已明顯泛黃，細(xì)胞數(shù)量巨增。 1)THP-1細(xì)胞喜歡酸性條件，你不要老是換培養(yǎng)基。越酸的條件，細(xì)胞密度越大，細(xì)胞就長得越好。 2） 不要頻繁換液，一般2-3次換液離心一次（只是補(bǔ)充培養(yǎng)基） 3） 使用1640（ATCC推薦），注意加碳酸氫鈉2.5g就可以了，寧酸勿堿 4） 注意凍存的時候密度大些，推薦用血清凍存 5）感覺Hyclone的血清比較好 6）復(fù)蘇比較慢，建議開始用小瓶，不要用一次性的 http://www.atcc.org/ATCCAdvanced ... emplate=cellBiology ATCC Advanced Catalog Search ? Product Details Propagation: ATCC complete growth medium: The base medium for this cell line is ATCC-formulated RPMI-1640 Medium, Catalog No. 30-2001. To make the complete growth medium, add the following components to the base medium: 2-mercaptoethanol to a final concentration of 0.05 mM; fetal bovine serum to a final concentration of 10%. Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% Temperature: 37.0°C Subculturing: Protocol: Cultures can be maintained by the addition of fresh medium or replacement of medium. Alternatively, cultures can be established by centrifugation with subsequent resuspension at 2-4 X 10(5) viable cells/ml. Subcultutre when cell concentration reaches 8X105) cells/ml.Do not allow the cell concentration to exceed 1 X 10(6) cells/ml. Medium Renewal: Every 2 to 3 days Preservation: Freeze medium: Complete growth medium supplemented with 5% (v/v) DMSO Storage temperature: liquid nitrogen vaporhase Doubling Time: approximately 26 hrs |
3樓2011-03-17 13:48:48
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