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什么是 MTT assay 已有4人參與
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 實驗技術 |
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4樓2009-07-24 00:25:16
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
jdklgjldg(金幣+1,VIP+0): 7-23 22:21
小木蟲: 金幣+2, 帖子真精彩 2015-09-24 22:08:03
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小木蟲: 金幣+2, 帖子真精彩 2015-09-24 22:08:03
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MTT原理 MTT全稱為3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，是一種黃顏色的染料�；罴毎�粒體中琥珀酸脫氫酶能夠代謝還原MTT，同時在細胞色素C的作用下，生成藍色（或藍紫色）不溶于水的甲臜（Formazan），甲臜的多少可以用酶標儀在570nm 處進行測定。在通常情況下，甲臜生成量與活細胞數(shù)成正比，因此可根據(jù)光密度OD值推測出活細胞的數(shù)目。由于死細胞中不含琥珀酸脫氫酶，因此加入MTT 不會有反應。 MTT 溶液的配制方法 通常，此法中的MTT 濃度為5mg/ml。因此，可以稱取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸緩沖液（PBS）或無酚紅的培養(yǎng)基中，用0.22μm濾膜過濾以除去溶液里的細菌，放4℃ 避光保存即可。在配制和保存的過程中，容器最好用鋁箔紙包住。 需要注意的是，MTT法只能用來檢測細胞相對數(shù)和相對活力，但不能測定細胞絕對數(shù)。在用酶標儀檢測結果的時候，為了保證實驗結果的線性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范圍內(nèi)。 實驗方法 This procedure is for cells in 96 well plates, if larger plates are used then adjust volumes accordingly. 1. Make a solution of 5mg/ml MTT dissolved in PBS and filter sterilise through a 0.2µM filter and stored at 2-8℃（can be stored for 3 months). 2. 5 hours before the end of the incubation, add 20 µl of MTT solution from step one to each well containing cells. 3. Incubate the plate at 37℃ for 4-5 hours. 4. Remove media with needle and syringe. 5. Add 150 µl(or 200 µl) of DMSO to each well and pipette up and down to dissolve crytals. 6. Put plate into the incubator for 5min to dissovle air bubbles. Transfer to plate reader and measure absorbance at wavelength between 500 and 600 nm(usually 570nm or 550nm). |
2樓2009-07-23 16:31:12
zdfang83
木蟲 (正式寫手)
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3樓2009-07-23 21:51:38
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