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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 動植物 » 綜合其他 » 【求助/交流】葉綠體完整度
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[交流]
【求助/交流】葉綠體完整度 已有2人參與
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| 各位蟲友，葉綠體完整度如何測定，謝謝啊 |
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09021122
木蟲 (正式寫手)
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★ ★ ★ ★ ★ ★
盧高飛(金幣+1):謝謝參與
1949stone(金幣+2,VIP+0): 1-19 18:05
盧高飛(金幣+3,VIP+0): 1-20 23:28
盧高飛(金幣+1):謝謝參與
1949stone(金幣+2,VIP+0): 1-19 18:05
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二、葉綠體被膜完整度的測定 【原理】 由于鐵氰化鉀不能透過被膜，故完整葉綠體在等滲介質(zhì)中不能進行鐵氰化鉀光還原的Hill反應。而失去完整被膜的葉綠體，鐵氰化鉀可以進入類囊體進行Hill反應。根據(jù)這一原理，比較脹破與未脹破的葉綠體Hill反應速率，就可計算葉綠體被膜的完整度。 【儀器與用具】 氧電極測氧全套裝置（見實驗20）；燒杯；微量進樣器；洗耳球等。 【試劑】 測定介質(zhì)Ⅰ和Ⅱ 見一。 100mmol/L鐵氰化鉀：稱3.29g鐵氰化鉀溶于水，定容至100ml。 100mmol/L NH4Cl：稱0.54g NH4Cl溶于水，定容至100ml。 適量葉綠體（20～50μg Chl/ml反應體系）。 【方法】 1．取0.1ml葉綠體提取液加到0.9ml的蒸餾水中并攪拌1min，使葉綠體被膜脹破，加1ml測定介質(zhì)Ⅰ懸浮備用。 2．取0.1ml未脹破葉綠體提取液加入反應杯中，視反應杯體積加入測定介質(zhì)Ⅱ，加入適量鐵氰化鉀和NH4Cl，使鐵氰化鉀和NH4Cl的最終濃度都為1mmol/L。攪拌，平衡1min，照光測定Hill反應放氧速率，記錄5min，然后清洗反應杯。 3．將已脹破葉綠體加入反應杯中，再加入適量測定介質(zhì)Ⅱ、鐵氰化鉀和NH4Cl，使反應體系物質(zhì)最終濃度同未脹破葉綠體測定體系，測定過程同2。 4．分別計算脹破和未脹破的葉綠體測定體系中單位時間的放氧量(或Hill反應速率)。 5．計算被膜完整度。 被膜完整度（%）= 式中 A－脹破葉綠體單位時間內(nèi)的放氧量（或Hill反應速率） B－未脹破葉綠體單位時間內(nèi)的放氧量（或Hill反應速率） 【注意事項】 1. 本實驗所用試劑要存放在冰箱中，存放時間不宜過長，最好現(xiàn)配現(xiàn)用。 2. 葉綠體的分離要在0～4℃下進行，玻璃器皿和溶液都須預冷，操作要快，整個分離過程最好在5min內(nèi)完成。 3. 離心過程中離心機的轉速不宜過高，否則葉綠體中的淀粉粒會打破葉綠體被膜。 4. 被膜完整度的測定過程中，反應杯內(nèi)破碎葉綠體與完整葉綠體的葉綠素含量應相等。 |
2樓2010-01-19 17:09:36
louyiceng
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4樓2010-04-25 21:09:56
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