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dy_414木蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助/交流】關(guān)于scFv的二硫鍵復(fù)性 已有2人參與
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本人在做單鏈抗體scFv，為了提高分子穩(wěn)定性在VH和VL中間突變了一個鏈間二硫鍵（G-C，S-C）然后進(jìn)行復(fù)性。現(xiàn)在用的方法是滴定復(fù)性，反應(yīng)體系pH為8.1（蛋白等電點大約在6.8）thiol-disulfide exchange反應(yīng)的電勢由GSSG/GSH (1:10)提供。試過很多條件，包括體系pH，GSSG/GSH濃度及比例，復(fù)性液中變性劑濃度等等，但是始終沒有特別好的結(jié)果。有過一次穩(wěn)定性不錯的實驗，但是非還原電泳顯示復(fù)性的蛋白是一個混合物. 目前已經(jīng)請教了幾乎能請教到的老師和博士，大家把能出的主意都出了，但是幾乎沒有像樣的數(shù)據(jù)（文獻(xiàn)很多都可以，但是沒有一個能重復(fù)出來的）。望諸位高手給予協(xié)助，謝謝！ |
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dy_414
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3樓2010-03-04 21:28:57
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10樓2010-03-06 13:25:32
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