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wangxuanxuan鐵桿木蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助】土壤脲酶活性測定中的問題 已有38人參與
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我現(xiàn)在測土壤中的脲酶活性，用的是比色法。結(jié)果發(fā)現(xiàn)無土對照的數(shù)值很大，不清楚是什么原因。請哪位做過這方面的給解釋下，謝謝。 試驗(yàn)步驟：試劑：1）甲苯 2）10%尿素：稱取10g尿素，用水溶至100ml。 3）檸檬酸鹽緩沖液（PH6.7）：184克檸檬酸和147.5克氫氧化鉀溶于蒸餾水。將兩溶液合并，用1mol/LNaOH將PH調(diào)至6.7，用水稀釋至1000毫升。 4）苯酚鈉溶液（1.35mol/L）：62.5克苯酚溶于少量乙醇，加2毫升甲醇和18.5毫升丙酮，用乙醇稀釋至100毫升（A），存于冰箱中；27克NaOH溶于100毫升水（B）。將AB溶液保存在冰箱中。使用前將2溶液各20毫升混合，用蒸餾水稀釋至100毫升。 5）次氯酸鈉溶液：用水稀釋試劑，至活性氯的濃度為0.9%，溶液穩(wěn)定。 6）氮的標(biāo)準(zhǔn)溶液：a 精確稱取0.4717克硫酸銨溶于水并稀釋至1000ml，得到1ml含有0.1mg氮的標(biāo)準(zhǔn)液 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：吸取配置好的氮溶液20ml，定容至100ml，即稀釋了5倍，吸取1，3，5，7，9，11，13ml移至50ml容量瓶，加水至20ml，再加入4ml苯酚鈉，仔細(xì)混合，加入3ml次氯酸鈉，充分搖蕩，放置20分鐘,用水稀釋至刻度。將著色液在紫外分光光度計(jì)上于578nm處進(jìn)行比色測定，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，以光密度值為縱坐標(biāo)繪制曲線圖。 1) 稱取5g過1mm篩的風(fēng)干土樣于50ml容量瓶中。 2) 向容量瓶中加入1ml甲苯（以能全部使土樣濕潤為度）并放置15分鐘 3) 之后加入10ml 10％尿素溶液和20ml檸檬酸緩沖液（PH6.7），并 仔細(xì)混合 4) 將容量瓶放入38攝氏度恒溫箱中，培養(yǎng)3h 5) 培養(yǎng)結(jié)束后，用熱至38攝氏度水稀釋至刻度，仔細(xì)搖蕩，并將懸液用致密濾紙過濾于三角瓶中。 6) 顯色：吸取1ml濾液于50ml容量瓶中，加入10ml蒸餾水，充分震蕩，然后加入4ml苯酚鈉，仔細(xì)混合，再加入3ml次氯酸鈉，充分搖蕩，放置20分鐘，用水稀釋至刻度，溶液呈現(xiàn)（青定）酚的藍(lán)色。 7) 1h內(nèi)在（（青定）酚的藍(lán)色在1h內(nèi)保持穩(wěn)定）在分光光度計(jì)上用1cm液槽，于578nm處將顯色液進(jìn)行比色測定。 8) 無土對照：不加土樣，其他操作與樣品實(shí)驗(yàn)相同。以檢驗(yàn)試劑純度，整個(gè)實(shí)驗(yàn)設(shè)置一個(gè)對照 9)無基質(zhì)對照：以等體積的水代替基質(zhì)，其他操作與樣品實(shí)驗(yàn)相同。每個(gè)土樣都設(shè)此對照。 結(jié)果計(jì)算：土壤脲酶活性以24小時(shí)后100g土壤中NH3－N的毫克數(shù)表示。 M＝（X樣品－X無土－X無基質(zhì)）*100*10 式中：M－土壤脲酶活性值 X樣品――樣品實(shí)驗(yàn)的光密度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上對應(yīng)的NH3－N毫克數(shù) X無土――無土對照實(shí)驗(yàn)中的光密度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上對應(yīng)的NH3－N毫克數(shù) X無基質(zhì)――無基質(zhì)對照實(shí)驗(yàn)中的光密度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上對應(yīng)的NH3－N毫克數(shù) 100 ――樣品定容的體積與測定時(shí)吸取量的比值 10 ――酶活性單位的土重與樣品土重之比值 [ Last edited by wangxuanxuan on 2010-3-21 at 21:24 ] |
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LZ你好，我做實(shí)驗(yàn)曾經(jīng)遇到過幾乎一模一樣的問題。后來經(jīng)過改進(jìn)，結(jié)果便好了。 主要原因：培養(yǎng)時(shí)間太短，稀釋倍數(shù)太大。 1、培養(yǎng)3h是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的，要培養(yǎng)24h。 2、培養(yǎng)結(jié)束后，不要加水到刻度線，直接過濾提取1ml就行了。 3、我做的是亞熱帶常綠闊葉林的土壤，標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃度設(shè)定得很好，結(jié)果基本都在曲線的濃度之內(nèi)。 |
22樓2012-12-03 11:22:29
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