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[交流]
【求助/交流】熒光定量PCR的引物怎么設(shè)計(jì) 已有1人參與
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各位大牛，熒光定量PCR的引物怎么設(shè)計(jì)？ 我的序列已得到了500bp，無內(nèi)含子，但是我上次設(shè)計(jì)的引物定量的擴(kuò)增圖有幾個(gè)基本都沒有起峰。 很茫然，我用primer 5設(shè)計(jì)的。請問有什么要注意的嗎？ |
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2樓2010-04-01 16:48:16
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如果你們用的是ABI公司的儀器，他們有購機(jī)贈(zèng)送的軟件，Primer Express，用來設(shè)計(jì)定量PCR的引物是蠻好的，這個(gè)軟件只要買ABI定量PCR儀都會(huì)送的，單獨(dú)買是很貴的，所以要好好利用資源，不要浪費(fèi)呢！ 如果沒有的話，可以用primer5或者6。個(gè)人覺得，跟primer同一個(gè)公司開發(fā)的AlleleID軟件也是挺好用的，AlleleID有不同的設(shè)計(jì)程序，可以讓你選擇是設(shè)計(jì)Taqman探針和引物、SYBY Green的引物，還是分子信標(biāo)等方法用的引物，里面的默認(rèn)參數(shù)設(shè)置都是針對不同方法的要求，例如用SYBY Green法的引物，設(shè)計(jì)出來再用其他的軟件分析，發(fā)現(xiàn)確實(shí)不容易產(chǎn)生引物二聚體，實(shí)際做實(shí)驗(yàn)的效果也是挺理想的，具體這些軟解的下載破解可以在論壇里面搜一下，有很多蟲友提供了資源 也可以短信我~~~祝實(shí)驗(yàn)順利！ |
6樓2010-04-10 18:19:36
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