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為什么我P完后一跑膠就成這種結(jié)果，是不是什么加多了，請(qǐng)大家分析分析。我的體系是：雙蒸水15.7 ，10XBUFFER 2.5，DNTP 2.0，鎂離子2.0，引物各1，酶0.3，模板0.5，總體系是25微升。我用這個(gè)體系前兩天做出來(lái)了，別人用這個(gè)體系也出條帶了，但第三天做出來(lái)就成這結(jié)果了。而且以前做出的現(xiàn)在也不出了，我跑膠時(shí)百分之2.0的膠，90伏跑50分鐘。

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1樓 2010-04-24 10:31:52

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1949stone(金幣+1): 2010-04-30 10:24

PCR牽扯的因素很多，尋找原因很難，再做一遍吧。
模板用錯(cuò)了、退火溫度太高、引物少加一條、酶的活性有問(wèn)題等都有可能

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生命的海洋里，我是藍(lán)色的一滴

2樓2010-04-24 10:43:32

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1949stone(金幣+1):？ 2010-04-30 10:24

模板濃度會(huì)導(dǎo)致P不出來(lái)嗎？別人說(shuō)我跑膠的電壓太低了，產(chǎn)物降解了，我覺(jué)得應(yīng)該不會(huì)在跑膠時(shí)降解吧，這種可能性太小了吧

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3樓2010-04-24 10:48:31

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為什么泳道會(huì)全白呢？

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4樓2010-04-24 10:49:11

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lstt09nk(金幣+3):歡迎多多交流~~ 2010-04-24 12:39

我覺(jué)得是你的模板出問(wèn)題了�？赡苁潜晃廴窘到饬耍ㄗh你跑一下模板。如果沒(méi)問(wèn)題，那就可能是你的PCR體系或者程序出問(wèn)題了。再者如果你模板的量加的太多，也會(huì)出現(xiàn)圖中彌散的情況，可現(xiàn)在你根本就看不見(jiàn)有目的條帶出現(xiàn)

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5樓2010-04-24 10:57:06

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1949stone(金幣+2):歡迎發(fā)圖 2010-04-30 10:24

第一張圖片是我P出來(lái)后用1.2的膠120伏跑的，第二張是我用2.0的膠90伏跑的，都是同一個(gè)產(chǎn)物，第二張上能看見(jiàn)有條帶，比較模糊，MANKER 是DL1000，最亮的那個(gè)帶是400。本來(lái)想著用60°退火可以出帶，我就用58試了下，居然沒(méi)帶。

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6樓2010-04-24 11:08:10

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好像是模板太多了，不知用的是什么模板？濃度多大？
和電泳時(shí)的電壓關(guān)系應(yīng)該不太大。

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7樓2010-04-24 11:17:36

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呵呵，你再用能跑出來(lái)的那個(gè)程序做一下，不過(guò)你得少加模板的量了（如稀釋10倍或50倍之類(lèi)的再加），那白色的背景是模板啊。先解決背景再考慮優(yōu)化程序。試試吧

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8樓2010-04-24 11:20:46

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模板是小麥葉片的，沒(méi)測(cè)過(guò)濃度。

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9樓2010-04-24 11:29:01

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呵呵，先跑一下模板保證沒(méi)污染再按我上面說(shuō)的試一下吧

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10樓2010-04-24 11:40:22

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