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PCR電泳圖怎么會(huì)這樣？各位幫忙分析一下吧
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PCR電泳圖怎么會(huì)這樣？各位幫忙分析一下吧，多謝了！ |
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shuangzi8761
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【答案】應(yīng)助回帖
天yi(金幣+2): 2011-12-06 12:35:51
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1.你的DNA模板問(wèn)題：純度不夠，有RNA污染，拖尾的那些就是。解決方法在模板中加人適量RNase. 2.引物間形成引物二聚體：在你圖的最上方那些模糊成團(tuán)的就是。解決方法可以將一對(duì)引物用MNAMAN上面比下，看是否會(huì)有引物二聚體情況。 3.可根據(jù)PCR原理，提高退火溫度，一般2-3度；增加Taq酶量，多加0.5倍；減少循環(huán)數(shù)，28~30cycle足夠。 4.建議樓主換下M，從圖上看你的目的帶（最下面那些），比你M最大標(biāo)量還大。 |
5樓2011-12-06 09:40:55
A406
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個(gè)人覺(jué)得首先你要確定你的實(shí)驗(yàn)?zāi)康�，不同目的�?shí)驗(yàn)要求也不同，其次確認(rèn)模板是否符合你的PCR，鑒定的話(huà)模板純度不夠也可以，只要能有一定亮度的PCR條帶，第三，明確你的目的條帶電泳是在什么位置，PCR程序是否正確，引物是否有問(wèn)題（做個(gè)陽(yáng)性對(duì)照），二聚體是會(huì)影響條帶亮度，但要是如果實(shí)驗(yàn)沒(méi)有很高要求，比如鑒定，存在二聚體也沒(méi)關(guān)系。 如果想通過(guò)PCR獲得目的基因，那就在目的基因上下取二十多堿基作為引物（不用軟件設(shè)計(jì)），只要電泳條帶無(wú)雜帶，大小合適，測(cè)序結(jié)果正常就OK，不行就換對(duì)引物唄，或者剛開(kāi)始多合成幾對(duì)引物，現(xiàn)在合成引物及測(cè)序也很便宜很快。 |
6樓2011-12-06 12:56:39
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8樓2011-12-07 09:37:50
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2樓2011-12-06 01:00:30
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3樓2011-12-06 09:26:17
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329181203lin
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10樓2012-05-08 21:14:21
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