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marc0907金蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】請(qǐng)教native page的相關(guān)知識(shí) 已有3人參與
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想做一下native page ,但是對(duì)于其中的一些訣竅,還不是很清楚,所以想請(qǐng)教各位大俠,能否給小弟上一課,小弟在此先謝了!哈哈! 對(duì)于其中涉及到的一些試劑,小弟已經(jīng)有所了解了,不太明白的主要集中于如何做膠,如何處理樣品及maker,還有電泳過程中的一些參數(shù)設(shè)置及注意點(diǎn),小弟在此先謝了 |
木蟲 (正式寫手)
在通往變態(tài)的坦途上
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做膠得先明白的要跑的樣品的酸堿性,如果是蛋白一般可以預(yù)測(cè)一下等電點(diǎn)。 等明確了酸堿后就考慮你的膠濃度,寫好配方 然后就可以配膠了,操作跟非變性膠差不多。但是膠板之類的不要跟變性膠的混用了。 非變性膠可以多加點(diǎn)temed,多凝一些時(shí)間。 非變性膠一般用前需要預(yù)電泳,我一般100V,1h。 電泳我一般4度冷庫10mA穩(wěn)流,有時(shí)候也用100V穩(wěn)壓 酸性樣品電泳跟變性的差不多 堿性的需要電極倒置 樣品只要不是離子濃度太高,沒什么大問題 其實(shí)你一用搜索,講native膠的原理制作注意事項(xiàng)常見問答的有一堆 我雖然做過這個(gè),但確實(shí)不是高手,不能教你什么技術(shù) 我想跟你說的,是學(xué)習(xí)的方法,在希望別人能給自己上一課的時(shí)候, 自己先預(yù)習(xí)一下,網(wǎng)上那么多資料,你看的多了自然心中有數(shù)。再有針對(duì)性的提出不懂的問題,也讓后面的高手老師們心里有個(gè)底 網(wǎng)上不缺乏熱心的高手,但是高手的時(shí)間也是時(shí)間,你搜索可以解決的問題為什么非得讓他們?cè)俳o你打一遍或復(fù)制一遍? 看你其實(shí)還是看了點(diǎn)資料的,那么你提問的時(shí)候能不能問的稍微具體點(diǎn)呢?那么多樣品你是希望得到標(biāo)準(zhǔn)回答各種樣品如何處理?其實(shí)問題問的越詳細(xì)解決的越簡(jiǎn)單。 特殊時(shí)期內(nèi)分泌不穩(wěn)中,亂說一堆,見諒 其實(shí)只是我的沙發(fā)控發(fā)作了 [ Last edited by zjzz on 2010-4-24 at 20:02 ] |

金蟲 (小有名氣)
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小弟也確實(shí)看了很多資料,也請(qǐng)教了一位曾今做個(gè)native page的師姐,緊隨其后我也做了一次實(shí)驗(yàn),但是實(shí)驗(yàn)以失敗告終,那我就說一下,試驗(yàn)中的情況和結(jié)果中出現(xiàn)的情況:1、事先,小弟也進(jìn)行了預(yù)電泳,時(shí)間為半小時(shí),不知道是不是短了一些;2、電泳過程中,我不能很確定其是否為較低的情況下進(jìn)行的,因?yàn),我只是將電泳槽整體放在冰上;3、試驗(yàn)中,由于不知道如何處理樣品,只是將樣品和上樣緩沖液混合了一下,不知道有沒有影響(marker事先我煮了幾分鐘);4、上樣時(shí)發(fā)現(xiàn),樣品并未像marker一樣,成股留流下,而是分叉的多股流下,不知道有沒有影響(甘油濃度絕對(duì)沒問題);5上樣時(shí),我加了兩個(gè)不同的marker,以判斷其大小,但是很奇怪的是,兩個(gè)marker都有很嚴(yán)重的拖尾現(xiàn)象(之前和之后的人用了都沒有問題) 看了上面的情況,不知道大俠有什么看法,和對(duì)我試驗(yàn)的一些建議! 小弟在此感激不盡! |
金蟲 (小有名氣)
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小弟也確實(shí)看了很多資料,也請(qǐng)教了一位曾今做過native page的師姐,緊隨其后我也做了一次實(shí)驗(yàn),但是實(shí)驗(yàn)以失敗告終,那我就說一下,試驗(yàn)中的情況和結(jié)果中出現(xiàn)的情況: 1、事先,小弟也進(jìn)行了預(yù)電泳,時(shí)間為半小時(shí),不知道是不是短了一些; 2、電泳過程中,我不能很確定其是否為較低的溫度下進(jìn)行的,因?yàn),我只是將電泳槽整體放在冰上; 3、試驗(yàn)中,由于不知道如何處理樣品,只是將樣品和上樣緩沖液混合了一下,不知道有沒有影響(marker事先我煮了幾分鐘); 4、上樣時(shí)發(fā)現(xiàn),樣品并未像marker一樣,成股流下,而是分叉的多股流下,不知道有沒有影響(甘油濃度絕對(duì)沒問題); 5上樣時(shí),我加了兩個(gè)不同的marker,以判斷其大小,但是很奇怪的是,兩個(gè)marker都有很嚴(yán)重的拖尾現(xiàn)象(對(duì)于marker,之前和之后的人用了都沒有問題) 看了上面的情況,不知道大俠有什么看法,和對(duì)我試驗(yàn)的一些建議! 小弟在此感激不盡! [ Last edited by marc0907 on 2010-4-24 at 22:53 ] |
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