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marc0907金蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】請教native page的相關(guān)知識 已有3人參與
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想做一下native page ，但是對于其中的一些訣竅，還不是很清楚，所以想請教各位大俠，能否給小弟上一課，小弟在此先謝了！哈哈！ 對于其中涉及到的一些試劑，小弟已經(jīng)有所了解了，不太明白的主要集中于如何做膠，如何處理樣品及maker，還有電泳過程中的一些參數(shù)設(shè)置及注意點，小弟在此先謝了 |
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木蟲 (正式寫手)
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7樓2010-04-26 19:11:27
zjzz
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marc0907(金幣+2): 2010-04-24 22:32
scelab(金幣+8):熱心蟲友，歡迎多來交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-25 21:15
marc0907(金幣+2): 2010-04-24 22:32
scelab(金幣+8):熱心蟲友，歡迎多來交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-25 21:15
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做膠得先明白的要跑的樣品的酸堿性，如果是蛋白一般可以預測一下等電點。 等明確了酸堿后就考慮你的膠濃度，寫好配方 然后就可以配膠了，操作跟非變性膠差不多。但是膠板之類的不要跟變性膠的混用了。 非變性膠可以多加點temed，多凝一些時間。 非變性膠一般用前需要預電泳，我一般100V，1h。 電泳我一般4度冷庫10mA穩(wěn)流，有時候也用100V穩(wěn)壓 酸性樣品電泳跟變性的差不多 堿性的需要電極倒置 樣品只要不是離子濃度太高，沒什么大問題 其實你一用搜索，講native膠的原理制作注意事項常見問答的有一堆 我雖然做過這個，但確實不是高手，不能教你什么技術(shù) 我想跟你說的，是學習的方法，在希望別人能給自己上一課的時候， 自己先預習一下，網(wǎng)上那么多資料，你看的多了自然心中有數(shù)。再有針對性的提出不懂的問題，也讓后面的高手老師們心里有個底 網(wǎng)上不缺乏熱心的高手，但是高手的時間也是時間，你搜索可以解決的問題為什么非得讓他們再給你打一遍或復制一遍？ 看你其實還是看了點資料的，那么你提問的時候能不能問的稍微具體點呢？那么多樣品你是希望得到標準回答各種樣品如何處理？其實問題問的越詳細解決的越簡單。 特殊時期內(nèi)分泌不穩(wěn)中，亂說一堆，見諒 其實只是我的沙發(fā)控發(fā)作了 [ Last edited by zjzz on 2010-4-24 at 20:02 ] |
2樓2010-04-24 19:52:12
marc0907
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小弟也確實看了很多資料，也請教了一位曾今做個native page的師姐，緊隨其后我也做了一次實驗，但是實驗以失敗告終，那我就說一下，試驗中的情況和結(jié)果中出現(xiàn)的情況：1、事先，小弟也進行了預電泳，時間為半小時，不知道是不是短了一些；2、電泳過程中，我不能很確定其是否為較低的情況下進行的，因為，我只是將電泳槽整體放在冰上；3、試驗中，由于不知道如何處理樣品，只是將樣品和上樣緩沖液混合了一下，不知道有沒有影響（marker事先我煮了幾分鐘）；4、上樣時發(fā)現(xiàn)，樣品并未像marker一樣，成股留流下，而是分叉的多股流下，不知道有沒有影響（甘油濃度絕對沒問題）；5上樣時，我加了兩個不同的marker，以判斷其大小，但是很奇怪的是，兩個marker都有很嚴重的拖尾現(xiàn)象（之前和之后的人用了都沒有問題） 看了上面的情況，不知道大俠有什么看法，和對我試驗的一些建議！ 小弟在此感激不盡！ |
3樓2010-04-24 22:47:52
marc0907
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小弟也確實看了很多資料，也請教了一位曾今做過native page的師姐，緊隨其后我也做了一次實驗，但是實驗以失敗告終，那我就說一下，試驗中的情況和結(jié)果中出現(xiàn)的情況： 1、事先，小弟也進行了預電泳，時間為半小時，不知道是不是短了一些； 2、電泳過程中，我不能很確定其是否為較低的溫度下進行的，因為，我只是將電泳槽整體放在冰上； 3、試驗中，由于不知道如何處理樣品，只是將樣品和上樣緩沖液混合了一下，不知道有沒有影響（marker事先我煮了幾分鐘）； 4、上樣時發(fā)現(xiàn)，樣品并未像marker一樣，成股流下，而是分叉的多股流下，不知道有沒有影響（甘油濃度絕對沒問題）； 5上樣時，我加了兩個不同的marker，以判斷其大小，但是很奇怪的是，兩個marker都有很嚴重的拖尾現(xiàn)象（對于marker，之前和之后的人用了都沒有問題） 看了上面的情況，不知道大俠有什么看法，和對我試驗的一些建議！ 小弟在此感激不盡！ [ Last edited by marc0907 on 2010-4-24 at 22:53 ] |
4樓2010-04-24 22:48:51
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