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[交流]
【求助/交流】有沒(méi)有人做過(guò)用水煮法提取DNA的啊，望賜教 已有19人參與
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本人提細(xì)菌DNA基因組，由于對(duì)DNA純度的要求不高，故想通過(guò)經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)便的方法提取（之前用試劑盒提，但比較貴），但經(jīng)過(guò)網(wǎng)上找的水煮法流程試驗(yàn)了兩次，都沒(méi)成功（跑電泳都沒(méi)跑出來(lái)），不知道這個(gè)方法到底可行不可行。。。 我是這么做的：菌液離心后去掉清液，EP管底部有菌體，加滅菌ddH2O（600微升左右吧）,然后沸水浴蒸煮10分鐘，再離心，取上清液。。。。理論上DNA就應(yīng)該溶于水中，但結(jié)果。。。悲劇啊。。望賜教~~最近導(dǎo)師催的緊，望各位蟲友幫幫忙 |
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| 你的菌是陽(yáng)性菌還是陰性菌，一般陽(yáng)性菌水煮效果就不好 |
6樓2010-04-27 08:51:16
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關(guān)于細(xì)菌DNA的提取，最好還是用反復(fù)煮沸和凍融法最好，單純的煮沸效果不佳。具體方法是：將菌體收集加無(wú)菌水后，先用液氮冷凍（一定要凍實(shí)），然后放到沸水浴中煮沸3-5分鐘，如此反復(fù)三次，再進(jìn)行離心和后續(xù)提取DNA的操作。 我這里有成套的方法，我們實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)用得很成熟了，如果你需要可以聯(lián)系我。 gaiyf@yahoo.cn |
9樓2010-04-27 16:25:41
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10樓2010-04-27 17:18:25
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