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嚇猴蹲木蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助/交流】ELISA實驗結(jié)果全陽性？？ 已有5人參與
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原理： 以多聚酪氨酸多肽為底物，在ATP存在條件下，用提取的酪氨酸激酶催化底物酪氨酸的磷酸化，用酶標(biāo)記的單克隆抗體檢測酪氨酸磷酸化程度，以O(shè)PD做為辣根過氧化物酶底物顯色。 實驗過程中，設(shè)置酶濃度固定，ATP濃度遞減，想尋找最適ATP濃度，但是結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同ATP對應(yīng)的OD值相同，無梯度變化，請教各位，什么原因呢？ 本考慮是否因為酶的濃度太低，ATP均過量導(dǎo)致此結(jié)果，但未加ATP的孔應(yīng)該不發(fā)生反應(yīng)，且OD值也應(yīng)該很低才對啊，不知道為什么OD值這么高呢，請各位指點指點，謝謝！附上數(shù)據(jù)。 ATP濃度 OD值 100uM 2.611 10 2.173 5 1.944 2.5 2.063 1.25 2.128 0.625 2.122 0 2.326 100uMATP,不加酶 0.189 不加ATP和酶 0.215 |
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2樓2010-04-29 18:59:14
yunaitong
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3樓2010-04-29 19:32:19
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4樓2010-05-12 15:18:55
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5樓2010-05-13 10:14:02
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6樓2013-09-13 08:54:30
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