 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1029 | 回復(fù): 4 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
pidou213木蟲 (正式寫手)
|
[交流]
【求助/交流】RACE 引物 已有4人參與
|
||
|
請(qǐng)問做RACE的引物用什么純化比較好？ HAP? PAGE?? 還是其他？？ 突然想到的，不知道怎么選擇 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有240人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
湖北師范大學(xué)招調(diào)劑啦
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 通過RT-PCR 獲得了一段保守序列 接著如何設(shè)計(jì)RACE引物
已經(jīng)有21人回復(fù)
- 關(guān)于takata公司的5‘RACE試劑盒中的引物設(shè)計(jì)
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 已經(jīng)得到cDNA部分堿基序列，怎么樣用RACE技術(shù)擴(kuò)增基因的3‘和5’末端
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】RACE特異引物不夠特異
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】5'-RACE求助
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 3‘RACE---測(cè)序結(jié)果沒有polyA尾巴，怎么回事？
已經(jīng)有6人回復(fù)
pidou213
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 2446.1
- 散金: 400
- 紅花: 5
- 帖子: 913
- 在線: 45.9小時(shí)
- 蟲號(hào): 448545
- 注冊(cè): 2007-11-01
- 性別: GG
- 專業(yè): 農(nóng)業(yè)昆蟲學(xué)
|
為什么引物在某些時(shí)候需要純化 DNA合成結(jié)束后，完整的DNA鏈在堿性溶液（如氫氧化銨）的作用下從固相支持物中解理下來。解離下來的溶液中既包含了完整的所需寡核苷酸，同時(shí)也包含了在合成過程中失敗的DNA鏈（錯(cuò)誤序列）。比如合成一個(gè)20個(gè)堿基寡核苷酸，其洗脫溶液中也包含了19，18，17個(gè)堿基等合成時(shí)錯(cuò)誤的序列。錯(cuò)誤序列的數(shù)量取決于合成效率。在許多實(shí)驗(yàn)如PCR中，這些錯(cuò)誤的序列會(huì)與正確的全長(zhǎng)產(chǎn)物競(jìng)爭(zhēng)，因此在使用之前需要將其去除以提高下游應(yīng)用的成功率。 不同應(yīng)用對(duì)純化方式的選擇 應(yīng)用領(lǐng)域 建議的純化方式 AFLPTM 分析 脫鹽引物在限制性片段擴(kuò)增多態(tài)性研究（ARFP）中可被成功應(yīng)用 反義研究 HPLC純化的引物在相關(guān)文獻(xiàn)中引用最多 循環(huán)測(cè)序 脫鹽純化的引物已經(jīng)足夠 文庫構(gòu)建中的第一鏈cDNA合成 用于文庫構(gòu)建中第一鏈合成的cDNA通常在其5’端有限制性內(nèi)切酶克隆位點(diǎn)，因此最好用全長(zhǎng)的，通過Cartridge、HPLC或PAGE純化的引物 熒光測(cè)序 四種純化級(jí)別的引物都可成功應(yīng)用 凝膠遷移實(shí)驗(yàn) 建議使用Cartridge、HPLC和PAGE純化的引物進(jìn)行凝膠遷移率實(shí)驗(yàn) GeneTrapper篩選 建議使用PAGE純化引物。如果購(gòu)買了脫鹽引物，可以使用PAGE純化說明書對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步純化。在GeneTrapper系統(tǒng)中的加尾反應(yīng)時(shí)，引物需要事先經(jīng)過酚抽提和乙醇沉淀。 恒溫測(cè)序 脫鹽引物已經(jīng)足夠，Cartridge、HPLC和PAGE純化引物也可以。 微陣列 標(biāo)準(zhǔn)脫鹽引物已經(jīng)足夠 PCR 對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)PCR，脫鹽引物即可正常使用，其它三種純度更高的方式也可以 5’端序列較為重要的PCR（例如限制性酶切位點(diǎn)，RNA聚合酶啟動(dòng)子） 為達(dá)到最高效率，Cartridge、，HPLC和PAGE純化的引物是最好的選擇。因?yàn)橐锖铣墒菑?’端到5’端，不完整的寡核苷酸的會(huì)從5’端缺失。在這些應(yīng)用中使用5’端序列完整的全長(zhǎng)序列是很重要的，否則缺失5’端部分序列的一組PCR產(chǎn)物將被合成 克隆接頭產(chǎn)物 全長(zhǎng)引物最適合有效的克隆，利用Cartridge、HPLC或PAGE純化方式可得到合適的引物。對(duì)大于60個(gè)堿基的引物，PAGE純化方式是最好的 位點(diǎn)特異性突變 一定要使用通過Cartridge、HPLC和PAGE純化得到的全長(zhǎng)引物，才可能得到最高比例的突變體克隆（尤其是預(yù)突變位點(diǎn)在5’端附近時(shí)）。采用脫鹽引物也可以得到想要的突變。然而，一些野生型親本載體有可能會(huì)覆蓋掉這些突變。 |
3樓2010-04-29 18:49:25
695
木蟲 (職業(yè)作家)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 4528.5
- 散金: 126
- 紅花: 5
- 帖子: 3149
- 在線: 394.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 347369
- 注冊(cè): 2007-04-16
- 專業(yè): 植物生理與生化
2樓2010-04-29 18:38:40
cato8163
銀蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 5 (幼兒園)
- 金幣: 83.8
- 散金: 20
- 帖子: 384
- 在線: 74.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 569576
- 注冊(cè): 2008-06-05
- 性別: GG
- 專業(yè): 草地科學(xué)
4樓2010-04-29 21:42:15
miya173
銀蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 541.2
- 帖子: 77
- 在線: 16.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 929918
- 注冊(cè): 2009-12-17
- 專業(yè): 作物分子育種
5樓2010-04-30 09:15:35
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +12 | 素年祭語 2026-03-31 | 15/750 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +4 | 林深溫瀾 2026-04-01 | 6/300 |
|
|
[考研] 求調(diào)劑推薦 材料 304 +21 | 荷包蛋hyj 2026-03-26 | 21/1050 |
|
|
|
[考研] 342求調(diào)劑 +12 | Mary Keen 2026-03-28 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 085601材料工程找調(diào)劑 +20 | oatmealR 2026-03-29 | 21/1050 |
|
|
|
[考研] 309求調(diào)劑 +19 | 誰不是少年 2026-03-29 | 19/950 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑 +8 | y-yh 2026-04-01 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 材料專碩322分 +9 | 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-01 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 339求調(diào)劑 +5 | zjjkt 2026-03-31 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 346求調(diào)劑 一志愿070303有機(jī)化學(xué) +11 | 蘿卜燉青菜 2026-03-28 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 254材料與化工求調(diào)劑 +3 | 翰冬林楠 2026-03-30 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求化學(xué)調(diào)劑 +12 | wulanna 2026-03-28 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 22408 359分調(diào)劑 +4 | Qshers 2026-03-27 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 071010 323 分求調(diào)劑 +3 | Baekzhy 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料與化工304求B區(qū)調(diào)劑 +4 | 邱gl 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 本科雙非材料，跨考一志愿華電085801電氣，283求調(diào)劑，任何專業(yè)都可以 +6 | 芝士雪baoo 2026-03-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 352分 化工與材料 +5 | 海納百川Ly 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +11 | 陽陽哇塞 2026-03-27 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 272求調(diào)劑 +7 | 腳滑的守法公民 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿吉大071010，316分求調(diào)劑 +3 | xgbiknn 2026-03-27 | 3/150 |
|