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wangxueqin金蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】PCR法克隆基因 已有6人參與
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請(qǐng)教一下各位大俠: 我現(xiàn)在要克隆一個(gè)基因,在水稻里面是長(zhǎng)3000bp左右,沒(méi)有內(nèi)含子,可以設(shè)計(jì)引物先擴(kuò)增出中間一段,然后根據(jù)已經(jīng)序列,設(shè)計(jì)單引物,一直朝兩頭擴(kuò)增,這樣的思路可以么?是否可以擴(kuò)增出來(lái)整個(gè)完整的基因。 |
至尊木蟲(chóng) (文壇精英)

金蟲(chóng) (小有名氣)
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
鐵桿木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

金蟲(chóng) (小有名氣)
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這個(gè)基因在水稻里面是3000多bp,單拷貝,沒(méi)有內(nèi)含子的。我是設(shè)計(jì)的簡(jiǎn)并引物,在竹子里面來(lái)擴(kuò)這個(gè)基因,設(shè)計(jì)回來(lái)的引物,退火溫度已經(jīng)升到68度了,還是兩條很整齊亮度一致的帶,大小在800bp左右,兩條帶之間差了可能100個(gè)bp,郁悶啊,可能是引物 問(wèn)題了?目前的考慮是割膠,不知道行不行得通。都不知道哪個(gè)是雜帶,郁悶啊。 是有別人也在竹子里面擴(kuò)過(guò)這個(gè)基因,但是他們的序列沒(méi)有上傳到NCBI上面,所以也查不著。 |
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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