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394210516x銅蟲 (小有名氣)
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【求助】求助：細(xì)胞實驗用FFA的配制 已有5人參與
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各位蟲友，你們細(xì)胞實驗時要用到FFA時，如何進(jìn)行配制��？ 我在網(wǎng)上查了好多方法，還有一些國內(nèi)的文獻(xiàn)，都說配制前，先用乙醇或石油醚溶解一定質(zhì)量的脂肪酸，裝進(jìn)一個干凈的瓶子中。氮氣吹干，然后用0.15M KOH溶解。即可以使用。如果需要使用BSA，則事先和溶解于PBS中定量的BSA溶液按比例混合。 還有幾篇文獻(xiàn)中是這樣的： FFA溶液的制備 （文獻(xiàn)一）：FFA貯備液中油酸與棕櫚酸的比例為2∶1。溶解所需劑量的油酸和棕櫚酸于10 mL 99%酒精中，振搖1 h。每10 mmol/L FFA加入40 μL的NaOH（10 mol/L），混勻，置于通風(fēng)櫥中過夜干燥。加入10 mL蒸餾水，加熱溶液至呈透明皂液樣時，加入40 mL冰冷的10%小牛血清白蛋白，混勻。經(jīng)0.22 μm CA過濾器過濾消毒后將FFA貯備液存于-20 ℃。 FFA 的配制（文獻(xiàn)二）:取棕櫚酸 ,用乙醇配制成 100 mmol/ L的濃度;取不含 FFA 的牛血清白蛋白 ,用蒸餾水配制成 10 %的溶液;取 50μl 100 mmol/ L FFA 溶液 ,加入上述10 %BSA 溶液中 ,在55 ℃水浴中靜置15 min ,直至溶液澄清 , - 20 ℃保存。 在這里我想問：為什么要用氮氣吹干呢，用超凈工作臺上的風(fēng)把它吹干行嗎，先將其溶解又將其吹干的道理是什么？用乙醇只是溶解而沒有發(fā)生化學(xué)反應(yīng)生成乙醇酯吧？乙醇是不是在揮干的過程中全部揮發(fā)了？用乙醇溶解后FFA的濃度一般是多少？還有一定要加BSA嗎？如果我不加呢？加入BSA的原理又是什么？配制時NaOH和FFA的比例又是多少呢？配制好后為何會出現(xiàn)渾濁？ 望哪位高手能幫我解答一下，萬分感謝�。� |
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