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【求助/交流】菌種用NTG法誘變的具體步驟及注意點 已有2人參與
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dujing19841014
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3樓2010-05-20 08:24:55
HarveyWang
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applehappy(金幣+10):基本上您說的我也知道，只是關(guān)于誘變所用的菌液濃度我不是很清楚，但還是很感謝 2010-06-27 20:48:16
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我原來做過。 重要的一點是： 盡量污染更少的東西；不去回收利用已經(jīng)污染的器具。 污染過的東西，不要試圖去解毒后清洗， 統(tǒng)統(tǒng)倒入一個鐵皮桶內(nèi)，加些報紙和酒精，找個安全的地方，燒完后倒掉。 1）菌液一般10ml/250ml搖瓶，事先培養(yǎng)至大約OD600=1.0 . 2）第一次做時，我還稱量了一下NTG，（由于是本來就是含水的，不會很準(zhǔn)的），以后就拿個比較長的竹簽挑一小粒，直接放入菌液中。 3）搖床培養(yǎng)10 、20 、40、 60 min，取樣100 uL 直接涂選擇性平板（藥物濃度一般設(shè)計的很高，是文獻報道的十倍左右），能長出來的就挑來做驗證了。 4）其實，誘導(dǎo)20min-30，就有大批的細(xì)胞死亡了，再加上后面的抗性，菌體長出來就不錯啦。 這樣，每次要扔掉的東西是： 一個搖瓶， 四只平板 四個玻璃棒涂布器。 幾個槍頭小東西。 總價錢也就是20塊錢。 有機物統(tǒng)統(tǒng)燒黑碳化啦，不用回收利用。 |
2樓2010-05-20 04:20:39
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