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老夏853鐵桿木蟲(chóng) (著名寫手)
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[交流]
【求助/交流】有沒(méi)有做土壤微生物群落多樣性的 可以進(jìn)來(lái)交流一下 已有10人參與
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RT土壤中微生物多樣性， 用細(xì)菌 或者真菌 16s RNA基因通用引物做PCR之后做多樣性分析 在PCR這步試驗(yàn)中，從土壤中提取基因組后作PCR,真菌很容易能P出來(lái) 但是細(xì)菌卻很難 往往條帶彌散~~如圖  1 如果說(shuō) 震蕩劇烈使得基因組破碎，但是在做真菌PCR的時(shí)候 一半是用渦旋振蕩儀混勻的 但是也能夠P出來(lái) 而且很亮 2 如果說(shuō) 模板量多少，這個(gè)我已經(jīng)做了很多 梯度，不稀釋，稀釋10倍 稀釋50倍，100倍都做了 3 如果說(shuō)引物不對(duì)，用的是 通用引物，而且合成的公司也是做生物很專業(yè)的 公司 4 退火溫度，這個(gè)不好說(shuō) 我覺(jué)得退貨溫度上下差幾度 就算效果不好 也不可能一點(diǎn)都沒(méi)有 5 PCR 儀器，兩臺(tái) bio-rad 都用了 結(jié)果還是那樣 6 雜質(zhì)的問(wèn)題，從純細(xì)菌中提取的基因組 雜質(zhì)蛋白很多 如圖  但是P出來(lái)時(shí)這樣  就這么多了 各位幫忙分析一下吧 �。�！ |
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