 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3903 | 回復(fù): 11 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
guojing0000木蟲 (小有名氣)
|
[交流]
【求助/交流】緊急求助關(guān)于單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn) 已有11人參與
|
||
|
我最近在做彗星實(shí)驗(yàn)，但是很奇怪的是實(shí)驗(yàn)過程中不知道存在什么問題，跑完電泳后就看不到細(xì)胞了，視野是一片漆黑啊，嗚嗚嗚，很傷心，希望大家給我找找原因。 具體的實(shí)驗(yàn)方法如下： 2.1電泳膠板的制作 移液槍吸取10μL 1%正常熔點(diǎn)瓊脂糖，至4℃冷卻。待膠凝固（15min）后取出，置于冰上面。然后吸取150μL0. 5％正常熔點(diǎn)瓊脂糖，待膠稍微凝固加上潔凈的蓋玻片，至至4℃冷卻。待膠凝固（15min）后取出。之后用手指肚緩慢滑去蓋玻片。吸取25μL細(xì)胞懸浮液與75μL低熔點(diǎn)瓊脂糖混和，迅速將細(xì)胞混合液滴到第一層膠上，加蓋玻片讓其均勻鋪開，置4℃15min，使瓊脂固化。 2.2細(xì)胞裂解 移開蓋玻片，將載玻片浸入新配制的4℃裂解液中，在4℃冰箱中放置至少1h，但時間不能過長，長時間的裂解可能導(dǎo)致裂解液沉淀。 2.3 DNA解旋 輕輕移去蓋玻片后將載玻片水平并列置于電泳槽陽極端，電泳槽中盛有新配制堿性電泳緩沖液，約覆過載玻片2.5mm，放置30min。 2.4電泳 調(diào)整電泳槽中緩沖液面高度，使電泳儀的電壓為25V(恒壓)，電流為300mA，電泳20min。 2.5中和、染色 電泳結(jié)束后取出玻片用蒸餾水沖洗3次，并用濾紙吸去多余的水分，放小瓷盤，沿器壁加入0.4mol•L-1Tris-HCl(pH=7.5)緩沖液，中和3次，每次5分鐘，中間更換中和液。 2.6觀察和分析： 各組載玻片加入染色劑染色5min后，用熒光顯微鏡觀察，用隨機(jī)軟件在自動曝光條件下拍照獲取彗星圖像后，用CASP軟件分析測量DNA遷移的各種參數(shù)。 3． 實(shí)驗(yàn)試劑配制方法 試劑的配置： 正常熔點(diǎn)的瓊脂（normal melting agarose）；低熔點(diǎn)的瓊脂（low melting agarose）；Tris；肌氨酸鈉（Sodium sarcosinate）；Triton X-100；DMSO（dimethyl sulfoxide；二甲基亞砜）； EB（ethidium bromide）；NaCl；Na2EDTA；EDTA；NaOH；KCl；Na2HPO4；KH2PO4；乙醇 1%正常熔點(diǎn)的瓊脂（無Ca2+、Mg2+的PBS配制）： 配 10ml 需瓊脂為：0.1g，稱量完放入水浴鍋，使水浴鍋溫度不斷上升至95攝氏度，觀察到澄清透明時方可。 0.5%正常熔點(diǎn)的瓊脂（無Ca2+、Mg2+的PBS配制）： 配 5ml 需瓊脂為：0.05g，稱量完放入水浴鍋，使水浴鍋溫度不斷上升至95攝氏度，觀察到澄清透明時方可。 0.7%低熔點(diǎn)的瓊脂（無Ca2+、Mg2+的PBS配制）： 配 10ml 需瓊脂為：0.7g，稱量完放入水浴鍋，使水浴鍋溫度不斷上升至37攝氏度，觀察到澄清透明時方可。 細(xì)胞裂解液（4℃）： 2.5M NaCl；100mM Na2EDTA；10mM Tris；調(diào)pH至10；1%肌氨酸鈉；臨用前加1% Triton X-100，10% DMSO 配500ml 需：NaCl 73.05g；Na2EDTA 18.61g；Tris 0.61g；肌氨酸鈉5g；Triton X-100 5ml；DMSO 50ml，NaOH 4g 配制方法：先用300ml滅菌水溶解NaOH 4g，然后加入肌氨酸鈉，用磁力攪拌加熱溶解，然后再加入其它物質(zhì)。臨用前1小時加入1% Triton X-100，10% DMSO，磁力攪拌無固體后，放入4攝氏度冰箱。 電泳緩沖液： 1mM Na2EDTA和300mM NaOH，調(diào)pH＞13，現(xiàn)用現(xiàn)配。 pH 7.5，0.4M Tris： 配100ml需Tris為：4.8456g，加盡量少的水溶解，用HCl調(diào)節(jié)pH=7.5 碘化丙錠PI水溶液：2mg/l EB染色劑（4℃暗處保存） 需要補(bǔ)充一句的是，我的PI是去年1月份配置的，放置到現(xiàn)在采用，請問可以嗎？配置時的濃度是100mg/l的，現(xiàn)在每次使用前稀釋。 希望大家知無不言，言無不盡啊，我實(shí)在是找不到原因了啊 謝謝各位大蝦啦！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有294人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有15人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 【求助/交流】請問關(guān)于非變性凝膠電泳的問題
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】凝膠電泳時如何分開大小相差10-20個堿基對的目的條帶
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助】求助：單細(xì)胞凝膠電泳 和溶酶體的中性紅染色實(shí)驗(yàn)？
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于瓊脂糖凝膠電泳
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 【求助/交流】請問 如何看核酸的凝膠電泳圖��？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】變性聚丙烯酰胺SRAP凝膠電泳
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】SDS-PAGE凝膠電泳
已經(jīng)有33人回復(fù)
- 【求助】SDS-PAGE凝膠電泳
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】請教瓊脂糖凝膠電泳問題
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于變性梯度凝膠電泳(DGGE)
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 【求助/交流】想問一下凝膠電泳緩沖溶液的配置
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】單細(xì)胞凝膠電泳
已經(jīng)有4人回復(fù)
9樓2014-04-18 09:32:35
angel619
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 767.3
- 散金: 4
- 帖子: 17
- 在線: 1.7小時
- 蟲號: 866277
- 注冊: 2009-10-09
- 性別: MM
- 專業(yè): 污染生態(tài)學(xué)
2樓2010-11-24 09:48:16
guojing0000
木蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 2315.6
- 散金: 3
- 紅花: 2
- 帖子: 155
- 在線: 108.8小時
- 蟲號: 453939
- 注冊: 2007-11-07
- 專業(yè): 環(huán)境污染化學(xué)
3樓2010-11-24 22:41:48
laq3389797
銀蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 582.9
- 帖子: 19
- 在線: 24.7小時
- 蟲號: 1298131
- 注冊: 2011-05-17
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
4樓2011-08-02 15:30:01
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085701環(huán)境工程，267求調(diào)劑 +9 | minht 2026-03-26 | 9/450 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑，一志愿南農(nóng)083200食品科學(xué)與工程 +5 | XQTJZ 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[材料工程] 一志愿C9材料與化工專業(yè)總分300求調(diào)劑 +7 | 曼111 2026-03-24 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩333求調(diào)劑 +8 | 北道巷 2026-03-24 | 8/400 |
|
|
|
[碩博家園] 招收生物學(xué)/細(xì)胞生物學(xué)調(diào)劑 +3 | IceGuo 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 336材料求調(diào)劑 +7 | 陳瀅瑩 2026-03-26 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 341求調(diào)劑 +7 | 青檸檬1 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 一志愿 本科 北科大 化學(xué) 343 +6 | 13831862839 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿北化求調(diào)劑 +3 | Jsman 2026-03-22 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +7 | 元夕元 2026-03-20 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 資源與環(huán)境 調(diào)劑申請(333分) +9 | holy J 2026-03-21 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 考研一志愿蘇州大學(xué)初始315（英一）求調(diào)劑 +3 | sbdksD 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 網(wǎng)絡(luò)空間安全0839招調(diào)劑 +4 | w320357296 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 【2026考研調(diào)劑】制藥工程 284分 求相關(guān)專業(yè)調(diào)劑名額 +4 | 袁奐奐 2026-03-25 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 306求0703調(diào)劑一志愿華中師范 +10 | 紙魚ly 2026-03-21 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 080500求調(diào)劑 +3 | zzzzfan 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研]
 085404電子信息284分求調(diào)劑
+4
|
13659058978 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 335求調(diào)劑 +4 | yuyu宇 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 384求調(diào)劑 +3 | 子系博 2026-03-22 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 336求調(diào)劑 +4 | 收到VS 2026-03-20 | 4/200 |
|