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dhmdddd木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[交流]
【求助/交流】電轉(zhuǎn)化效率 已有3人參與
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| 電轉(zhuǎn)化大腸桿菌，轉(zhuǎn)化的是DNA片段，電轉(zhuǎn)杯是0.1的，條件是1500V，5ms，轉(zhuǎn)了好多次都是失敗，感受態(tài)制備時(shí)用10%的甘油1ml洗3次，轉(zhuǎn)化時(shí)是先加5微升片段冰上放置5min，再加5微升再放5min，如何可以提高電轉(zhuǎn)化的效率？先在這邊謝過(guò)了��！ |
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dhmdddd(金幣+1):謝謝! 2010-06-01 19:30:11
scelab(金幣+2):歡迎多來(lái)交流！:tiger06: 2010-06-02 22:36:19
dhmdddd(金幣+1):謝謝! 2010-06-01 19:30:11
scelab(金幣+2):歡迎多來(lái)交流！:tiger06: 2010-06-02 22:36:19
| 我們實(shí)驗(yàn)室也是用的電轉(zhuǎn)化，電壓比你高1800V，一般我們是批量制感受態(tài)，放-80，轉(zhuǎn)化時(shí)先冰上放置2-3min，質(zhì)粒一般加1ul，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)2ul，復(fù)蘇1h，質(zhì)粒一般涂1ul，連接產(chǎn)物看情況。我不知道你這里的DNA片段是沒(méi)有環(huán)化的片段還是連接產(chǎn)物。你轉(zhuǎn)化率低低到什么程度？ |
2樓2010-06-01 18:27:34
dhmdddd
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3樓2010-06-01 19:29:15
lingn
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dhmdddd(金幣+1):謝謝，還有問(wèn)題請(qǐng)教！ 2010-06-01 20:17:12
lstt09nk(金幣+2):歡迎交流~ 2010-06-01 20:27:05
dhmdddd(金幣+1):謝謝，還有問(wèn)題請(qǐng)教！ 2010-06-01 20:17:12
lstt09nk(金幣+2):歡迎交流~ 2010-06-01 20:27:05
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拿已知濃度的質(zhì)粒先測(cè)一下感受態(tài)的效果怎么樣。如果好的話再轉(zhuǎn)連接產(chǎn)物，如果沒(méi)菌斑就是連接的問(wèn)題了。 另外你3次都用1ml洗嗎？洗不干凈吧，前兩次體積可以大一點(diǎn)，反正要離心的。 你居然加了10ul的連接產(chǎn)物，也不怕爆，我最多加4ul。加多了很容易爆的，一旦爆了肯定長(zhǎng)不出斑來(lái)。 |
4樓2010-06-01 19:43:31
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5樓2010-06-01 20:22:57
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6樓2010-06-02 22:09:43
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7樓2010-06-03 13:36:41
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8樓2010-06-04 13:47:52
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