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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 【求助/交流】藍白斑篩選
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sdluqun鐵桿木蟲 (著名寫手)
板磚隊長
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[交流]
【求助/交流】藍白斑篩選 已有5人參與
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| 做TA克隆，Amp/IPTG/X-gal的LB板子上沒有長藍斑，長了10個左右白斑，挑了一下，搖瓶過夜（加入氨芐），次日有6瓶長菌了，提質(zhì)粒，瓊脂糖電泳檢測，卻沒有條帶，這是為什么呢？請大家給點意見，謝謝 |
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ben1147
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2樓2010-06-04 15:13:43
fungixx
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5樓2010-06-04 15:52:43
fungixx
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lstt09nk(金幣+3):感謝分享經(jīng)驗~~ 2010-06-04 18:48:22
sdluqun(金幣+5):之前用Takara的做了好幾次，什么也沒找，我就買了promega的，體系用的就是您說的這個，也是4度冰箱過夜，這次出現(xiàn)了這種情況，哎，我都郁悶的不行了 2010-06-04 22:28:52
lstt09nk(金幣+3):感謝分享經(jīng)驗~~ 2010-06-04 18:48:22
sdluqun(金幣+5):之前用Takara的做了好幾次，什么也沒找，我就買了promega的，體系用的就是您說的這個，也是4度冰箱過夜，這次出現(xiàn)了這種情況，哎，我都郁悶的不行了 2010-06-04 22:28:52
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你用的Taq酶應該能在末尾加A吧，不知道你是用的什么T載體，我們用的是promego的pGEM-T easy ，鏈接體系一般： pGEM-T easy 1 ul 連接酶 1ul 2*buffer 5ul 連接片段 3ul 4℃連接過夜，效率挺高的啊。 [ Last edited by fungixx on 2010-6-4 at 18:22 ] |
6樓2010-06-04 18:19:26
85715623
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