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zhang8826857鐵桿木蟲 (著名寫手)
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[求助]
藍(lán)白斑篩選時(shí)IPTG，Xgal，Amp的用量
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藍(lán)白斑篩選時(shí)IPTG，Xgal，Amp的用量具體是多少啊？ 來個(gè)權(quán)威的！��！看了網(wǎng)上好多說法，都不大相同。。。。。糾結(jié)的我��！ 要權(quán)威的�。。。�咱不差錢。還有母液濃度，工作濃度等等 |
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joan198108
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zhang8826857(金幣+4): ★★★很有幫助 2012-01-10 20:46:19
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首先把IPTG配制成24 mg/ml（100 mM）的水溶液，并進(jìn)行過濾除菌后保存。然 后在100 ml的瓊脂培養(yǎng)基中，加入100 μl的上述溶液、200 μl的X-Gal（20 mg/ml 的二甲基甲酰胺（DMF）溶液）和100 μl的Amp（100 mg/ml），制作成IPTG、 X-Gal、Amp平板培養(yǎng)基。 當(dāng)DNA片段插入至pUC系列載體（或其他帶有l(wèi)acZ、Amp基因載體），然后轉(zhuǎn)化 至lacZ缺失細(xì)胞中后，涂布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培養(yǎng)基，可根據(jù)長(zhǎng)出 菌體的藍(lán)白色，而方便地挑選出基因重組體（白色為具有DNA插入片段的基因重組 體）. 這是它們的原文，http://www.takara.com.cn/?action ... =445&subclass=1，這是鏈接，點(diǎn)擊一下說明書，下載就可以了。金幣就免了，哈哈。 |
5樓2012-01-10 08:51:11
liuyu_sdili
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zhang8826857(金幣+5): ★★★很有幫助 2012-01-10 20:44:51
| Amp肯定是100ug/mg,x-gal是2%,每個(gè)平板取40uL涂布，IPTG是20%，每個(gè)平板取7uL涂布~~~以上是分子克隆里面的說法，其實(shí)只要能顯色就行，可以自己調(diào)整的。我剛做了一次發(fā)現(xiàn)顯色較淺，可能是顯色劑x-gal有問題，多多交流吧~~~ |
2樓2012-01-09 16:13:00
豆豆魚
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3樓2012-01-09 22:05:05
zhang8826857
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4樓2012-01-09 22:18:44
豆豆魚
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6樓2012-01-10 09:55:53
豆豆魚
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7樓2012-01-10 09:58:39
AnaSequence
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西瓜(金幣+3): 鼓勵(lì)應(yīng)助！經(jīng)驗(yàn)哦！ 2012-01-10 15:52:35
zhang8826857(金幣+5): ★有幫助 2012-01-10 20:45:28
| Amp少一點(diǎn)也是可以的，只要不養(yǎng)過頭出來太多衛(wèi)星菌落就可以了。IPTG多加一點(diǎn)也是可以的，加多的話，直接跟Amp一起加到培養(yǎng)基，混合再倒板都可以，就是起誘導(dǎo)作用而已。底物X-gal不能少，一般最后加，加了就要趕緊涂布，特別是平板吹得比較干的情況下，不然涂不均勻，影響顯色。顯色不好的話，放4°C冰箱，有幫助。 |
8樓2012-01-10 11:34:41
9樓2012-01-10 15:49:36
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10樓2012-01-10 17:14:05
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