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zhang8826857鐵桿木蟲 (著名寫手)
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[求助]
藍(lán)白斑篩選時(shí)IPTG，Xgal，Amp的用量
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藍(lán)白斑篩選時(shí)IPTG，Xgal，Amp的用量具體是多少��？ 來(lái)個(gè)權(quán)威的！��！看了網(wǎng)上好多說(shuō)法，都不大相同。。。。。糾結(jié)的我��！ 要權(quán)威的�。。�！咱不差錢。還有母液濃度，工作濃度等等 |
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豆豆魚
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3樓2012-01-09 22:05:05
liuyu_sdili
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西瓜(金幣+4): Good！ 2012-01-09 17:39:10
zhang8826857(金幣+5): ★★★很有幫助 2012-01-10 20:44:51
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西瓜(金幣+4): Good！ 2012-01-09 17:39:10
zhang8826857(金幣+5): ★★★很有幫助 2012-01-10 20:44:51
| Amp肯定是100ug/mg,x-gal是2%,每個(gè)平板取40uL涂布，IPTG是20%，每個(gè)平板取7uL涂布~~~以上是分子克隆里面的說(shuō)法，其實(shí)只要能顯色就行，可以自己調(diào)整的。我剛做了一次發(fā)現(xiàn)顯色較淺，可能是顯色劑x-gal有問(wèn)題，多多交流吧~~~ |
2樓2012-01-09 16:13:00
zhang8826857
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4樓2012-01-09 22:18:44
joan198108
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【答案】應(yīng)助回帖
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小丹木木(金幣+1, MolEPI+1): GOOD! 2012-01-10 09:45:41
西瓜(金幣+3): Good!追加獎(jiǎng)勵(lì)~ 2012-01-10 15:51:06
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首先把IPTG配制成24 mg/ml（100 mM）的水溶液，并進(jìn)行過(guò)濾除菌后保存。然 后在100 ml的瓊脂培養(yǎng)基中，加入100 μl的上述溶液、200 μl的X-Gal（20 mg/ml 的二甲基甲酰胺（DMF）溶液）和100 μl的Amp（100 mg/ml），制作成IPTG、 X-Gal、Amp平板培養(yǎng)基。 當(dāng)DNA片段插入至pUC系列載體（或其他帶有l(wèi)acZ、Amp基因載體），然后轉(zhuǎn)化 至lacZ缺失細(xì)胞中后，涂布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培養(yǎng)基，可根據(jù)長(zhǎng)出 菌體的藍(lán)白色，而方便地挑選出基因重組體（白色為具有DNA插入片段的基因重組 體）. 這是它們的原文，http://www.takara.com.cn/?action ... =445&subclass=1，這是鏈接，點(diǎn)擊一下說(shuō)明書，下載就可以了。金幣就免了，哈哈。 |
5樓2012-01-10 08:51:11
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