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nnsulei金蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助/交流】基因組中克隆啟動(dòng)子 已有7人參與
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| 我要從番茄基因組中克隆一啟動(dòng)子大概2200bp，怎么也P不出來，好不容易偶爾P出來?xiàng)l帶還很弱，承蒙各位大俠賜教啊怎么回事呢～～ |
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susizheng
木蟲 (著名寫手)
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2樓2010-06-07 23:10:17
exon2002
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4樓2010-06-08 08:44:05
austin2008
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5樓2010-06-08 09:37:05
ququr008
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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
scelab(金幣+3):熱心蟲友，歡迎多來交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-06-08 22:33:39
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從復(fù)雜基因組環(huán)境擴(kuò)增一段啟動(dòng)子常常會(huì)遇到擴(kuò)不出來，是很正常的。以上所說的各種方法都可以用來一試，你自己還可以想出很多的辦法，沒有絕對(duì)有效的辦法，如果有錢，你甚至可以用合成的辦法，也有人用分段擴(kuò)增再連接的辦法。只要擴(kuò)出來有目的片段大小的帶，并且條帶清晰就好辦。至于信號(hào)弱一點(diǎn)，可以加大擴(kuò)增量（管數(shù)）或者調(diào)整擴(kuò)增條件，來解決。只要擴(kuò)出了目的片段，就可以采用T載體等辦法構(gòu)入載體。 |
6樓2010-06-08 10:03:17
yuqianswim
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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我也在擴(kuò)啟動(dòng)子，3400bp，一個(gè)月了也沒有什么進(jìn)展，主要是雜帶太多，而且和目的條帶距離很近，連切膠都不好切，移植郁悶中，下面附上一張圖，本人認(rèn)為“1”對(duì)應(yīng)的泳道，從上數(shù)，第3條為我的目的條帶大小。我試過提高溫度，減少模板用量，都不行，我設(shè)計(jì)的引物是20bp左右。pcr體系20微升：buffer：2微升，dNTP:2.4，引物各1微升，模板：基因組DNA：0.4微升，LA酶：0.2。請(qǐng)各位大俠指教 圖片1.jpg |
7樓2013-02-27 17:06:55
haitian0625
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8樓2013-02-27 19:14:39
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