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[交流] 【求助/交流】大腸桿菌有的是表達(dá)載體的宿主，有些事克隆載體的宿主，他們的區(qū)別在哪? 已有9人參與

大腸桿菌有的是表達(dá)載體的宿主，有些事克隆載體的宿主，他們的區(qū)別在哪？克隆載體的宿主（JM109或NM522）可以用來(lái)作為表達(dá)載體的宿主嗎？

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1樓 2011-04-05 15:45:51

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jhu132llh

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大洪

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rainwander(金幣+2, EPI+1): 鼓勵(lì)交流~~~ 2011-04-05 19:20:42

表達(dá)載體也許可以用來(lái)做克隆載體
但是克隆載體一般是不能用來(lái)做表達(dá)載體的
原因如下：
例如：克隆載體DH5α有DNA酶缺陷，適合用于克隆（質(zhì)粒DNA不容易被干掉，可以過(guò)量復(fù)制），而表達(dá)載體BL21貌似是有蛋白酶缺陷，適合用于表達(dá)。

酶切、連接之后，不能保證片段一定連上去，所以需要一個(gè)驗(yàn)證的過(guò)程，這就需要提質(zhì)粒。所以先把連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到DH5α，挑選單菌落，然后驗(yàn)證。

就是說(shuō)，如果你需要把外源片段插入質(zhì)粒里，那在酶切、連接之后，先把重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到DH5α里面，然后篩選轉(zhuǎn)化子（例如，提質(zhì)粒后酶切驗(yàn)證、PCR驗(yàn)證等等）；篩選到含有正確的重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化子后，再搖菌，把重組質(zhì)粒提出來(lái)，轉(zhuǎn)化到BL21里面，用于誘導(dǎo)表達(dá)蛋白質(zhì)。

參考鏈接：http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=3037957&fpage=1

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青春的歲月，我們身不由己，只因這胸中燃燒的夢(mèng)想！

4樓2011-04-05 17:49:04

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newtime007

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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rainwander(金幣+2): 鼓勵(lì)交流~~~ 2011-04-05 19:21:09

克隆載體：是能夠通過(guò)限制性內(nèi)切酶，將目的DNA片段整合進(jìn)去，并且能夠轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞進(jìn)行表達(dá)的生物DNA。常見(jiàn)的有質(zhì)粒，病毒，噬菌體等
表達(dá)載體：是用來(lái)連接植入基因的DNA鏈.
根據(jù)上述載體的定義可知大腸桿菌中的表達(dá)載體的宿主和克隆載體的宿主市有區(qū)別的，它們的培養(yǎng)、選擇要與相應(yīng)的的功能基因?qū)?yīng)。

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上善若水，水善利萬(wàn)物而不爭(zhēng)

2樓2011-04-05 16:11:03

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郝釗

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rainwander(金幣+1): 鼓勵(lì)交流~~~ 2011-04-05 19:21:00

可能是有的菌株可以高效識(shí)別表達(dá)載體上的強(qiáng)啟動(dòng)子，另外一些則高效識(shí)別識(shí)別克隆載體上的復(fù)制起點(diǎn)，不同菌株有不同的特性。愚見(jiàn)

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3樓2011-04-05 16:35:39

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rainwander

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引用回帖:

Originally posted by jhu132llh at 2011-04-05 17:49:04:
表達(dá)載體也許可以用來(lái)做克隆載體
但是克隆載體一般是不能用來(lái)做表達(dá)載體的
原因如下：
例如：克隆載體DH5α有DNA酶缺陷，適合用于克隆（質(zhì)粒DNA不容易被干掉，可以過(guò)量復(fù)制），而表達(dá)載體BL21貌似是有蛋白酶缺 ...

我之前用過(guò)JM109做過(guò)表達(dá)宿主菌，并且成功了

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千萬(wàn)不要因?yàn)樽叩奶茫浟宋覀優(yōu)槭裁闯霭l(fā)~~~~~~ForDream~~~~~~

5樓2011-04-05 19:22:31

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Originally posted by rainwander at 2011-04-05 19:22:31:
我之前用過(guò)JM109做過(guò)表達(dá)宿主菌，并且成功了

樓主好強(qiáng)大

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6樓2011-04-06 10:17:33

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rainwander

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Originally posted by 20025405 at 2011-04-06 10:17:33:
樓主好強(qiáng)大

我不是樓主

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千萬(wàn)不要因?yàn)樽叩奶�，而忘記了我們�(yōu)槭裁闯霭l(fā)~~~~~~ForDream~~~~~~

7樓2011-04-06 18:13:43

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hkfgwww

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Originally posted by 20025405 at 2011-04-06 10:17:33:
樓主好強(qiáng)大

可以的啊，自己加入啟動(dòng)子就行了，克隆載體不就是缺少合適的啟動(dòng)子嗎?

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微生物發(fā)酵

8樓2011-04-07 08:26:45

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rambo1980

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我沒(méi)有嘗試過(guò)用克隆宿主細(xì)胞進(jìn)行表達(dá)，或者用表達(dá)宿主細(xì)胞進(jìn)行克隆，所以下面的討論僅以我所掌握的理論知識(shí)為基礎(chǔ)。按照我的理解：
1、克隆載體應(yīng)該用克隆載體的宿主進(jìn)行轉(zhuǎn)化。
   如進(jìn)行藍(lán)白斑篩選時(shí)，需要lacZ△M15的基因型。
2、表達(dá)載體應(yīng)該用表達(dá)載體的宿主進(jìn)行轉(zhuǎn)化。
   如pET載體系統(tǒng)，需要宿主菌基因組中有l(wèi)ac promoter驅(qū)動(dòng)的T7 RNA pol基因，才能轉(zhuǎn)錄外源目的基因基因。
   樓主的問(wèn)題，以前我也有過(guò)疑問(wèn)，可惜知識(shí)淺薄。我覺(jué)得要想真正搞懂，需要全面了解宿主基因型，希望樓下的網(wǎng)友不吝賜教！��！

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9樓2011-04-07 09:13:04

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602059625

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EPI給的有點(diǎn)水了

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10樓2011-04-07 19:21:27

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