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[交流]
【求助/交流】發(fā)酵液中氨基氮的測定 已有12人參與
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| 有沒有簡單一點(diǎn)的，凱氏定氮法太麻煩了， |
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reasonspare
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lstt09nk(金幣+3):熱心的斑斑~~ 2010-06-09 19:06:24
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To 蟲友：你說的問題很有問題： 測定氨基酸的含量的方法不下百種，關(guān)鍵看你要解決什么問題：要搞清你要做什么。 凱氏定氮法：測的全氮，而不是氨基酸。 另外，你是測定所有氨基酸的含量還是某種氨基酸的含量：α-氨基氮的測定（茚三酮法，見附表） 如果想知道所有的氨基酸的種類和含量：ＨＰＬＣ就完全可以。見附圖，18種氨基酸一下子定性定量分析全有了。 α-氨基氮的測定（茚三酮法） 1、實(shí)驗(yàn)試劑 a顯色劑 100克磷酸氫二鈉（Na2HPO4.12H2O） 60克磷酸二氫鉀（KH2PO4） 5.00克水合茚三酮 3.00克果糖 用水溶液溶解后稀釋至1升（此溶液在低溫下用棕色瓶可保存2周，pH應(yīng)為6.6-6.8。操作時(shí)可以按比例配成100ml）。 b稀釋溶液：2克碘酸鉀溶于600ml水中，再加入96%乙醇400ml. c標(biāo)準(zhǔn)溶液：溶107.2mg甘氨酸于100ml水中，0℃貯藏。用時(shí)按要求稀釋。該溶液含有200mgα-氨基氮/升。 2、實(shí)驗(yàn)操作 取糖化的麥芽汁1.00ml（或者是其他的合適量，使稀釋后的濃度為1-3mgα-氨基氮/升），放入100ml的容量瓶中，稀釋到刻度，搖勻。 標(biāo)準(zhǔn)甘氨酸溶液稀釋液：取1.00ml標(biāo)準(zhǔn)溶液，在100ml的容量瓶中稀釋到刻度。 取麥芽汁稀釋溶液、水、標(biāo)準(zhǔn)的甘氨酸溶液（三個(gè)）稀釋液各2.00ml，放入比色管中，（水用于空白對照），各比色管中分別加入1.00ml的顯色劑，搖勻，在沸水中加熱16min。（此時(shí)應(yīng)該準(zhǔn)備20℃的水浴） 20℃水浴中冷卻20min。 加入5.00ml的碘酸鉀稀釋溶液，搖勻，在30min內(nèi)于570nm處測定吸光度值。 3、計(jì)算 游離的α-氨基氮（毫克/升麥芽汁）=2×100× 樣品溶液吸光度值 / 標(biāo)準(zhǔn)溶液平均吸光度  [ Last edited by reasonspare on 2010-6-9 at 06:11 ] |
2樓2010-06-09 06:09:40
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3樓2010-06-09 08:25:15
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lstt09nk(金幣+2):很不錯，感謝分享~~ 2010-06-09 19:09:07
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公司SOP中抄出來的。 氨基氮化驗(yàn)方法 1 原理 氨基與中性甲醛反應(yīng)，生成中強(qiáng)酸，可用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定。 反應(yīng)式：4NH4 ＋ + 6HCHO = (CH2)6N4H＋ + 6H2O + 3H＋ RCHNH2CH2 + HCHO+ = RCH(NCH2)COOH + H2O OH- + H＋= H2O 2 試劑配制 2.1 18％中性甲醛溶液：量取分析純甲醛溶液2000ml于2000ml試劑瓶中，加入2000ml純化水，搖勻。臨用前倒入1000ml的試劑瓶中，以酚酞為指示劑，用0.03569mol/l的NaOH溶液滴定至微紅色。 2.2 甲基紅指示劑：稱取0.1g甲基紅，用無水乙醇溶解并稀釋至100ml。 2.3 酚酞指示劑：稱取1.0g酚酞，用無水乙醇溶解并稀釋至100ml。 2.4 鹽酸(0.1mol/l)、氫氧化鈉(0.03569mol/l)標(biāo)準(zhǔn)溶液：略。 3 測定 精密量取樣品00ml至250ml錐形瓶中，加入20ml純化水，甲基紅指示劑3滴，用0.1mol/l鹽酸滴定至紅色，放置3min，用0.03569mol/l氫氧化鈉溶液滴定至黃色。加入18%中性甲醛5 ml，搖勻放置3～5min。加入3滴酚酞指示劑，用0.03569mol/l氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，到達(dá)滴定終點(diǎn)時(shí)溶液由黃色變?yōu)槲⒓t色，記錄消耗的氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液體積。 4 計(jì)算 N(μg/ml)＝ M×VNaOH÷V樣品×m×1000 ≈ 100VNaOH 式中： M 為氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，mol/l； VNaOH 為滴定時(shí)消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，ml； V樣品 為量取樣品的體積，ml； m 為氮原子摩爾質(zhì)量，14。 |
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