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xjx11228木蟲 (正式寫手)
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[交流]
如何求酶促反應(yīng)中最大反應(yīng)速度?單位是什么?
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問(wèn)題:對(duì)于一個(gè)酶促反應(yīng),通常由米氏方程求米氏常數(shù)和最大反應(yīng)速度以及催化反轉(zhuǎn)常數(shù),可是有關(guān)數(shù)據(jù)只是底物一系列濃度及所對(duì)應(yīng)的吸光度值,請(qǐng)問(wèn)如何求出米氏常數(shù)?尤其是這個(gè)最大反應(yīng)速度的單位不好確定? 我是不是還缺少條件?文獻(xiàn)都是10^-8 M s^-1,這個(gè)如何得出?謝謝各位了。 [ Last edited by xjx11228 on 2010-6-9 at 16:34 ] |
蛋白質(zhì)純化技術(shù) |
金蟲 (正式寫手)
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所謂的標(biāo)準(zhǔn)曲線就是你的產(chǎn)物Y的濃度在你那臺(tái)分光光度計(jì)上的吸光值A(chǔ)之間的對(duì)應(yīng)關(guān)系,其實(shí)跟你的底物濃度沒有關(guān)系。也就是你配置一定濃度的產(chǎn)物(這個(gè)需要用純品,分析純的即可),測(cè)定每個(gè)濃度下的吸光值,做一條直線,就是你的標(biāo)準(zhǔn)曲線,就是說(shuō)產(chǎn)物濃度Y和吸光值A(chǔ)之間形成了一種關(guān)系:A=a+bY,這樣你用你的底物反應(yīng)完之后的反應(yīng)液測(cè)得的吸光度,實(shí)際上對(duì)應(yīng)著你的反應(yīng)液里有多少產(chǎn)物,根據(jù)你標(biāo)準(zhǔn)曲線的方程計(jì)算就出來(lái)了,這樣吸光值不就有用了嗎?偨Y(jié)來(lái)說(shuō),標(biāo)準(zhǔn)曲線就是建立一個(gè)吸光值與產(chǎn)物濃度的關(guān)系,明白了嗎? 這種標(biāo)準(zhǔn)曲線的做法是放之四海而皆準(zhǔn)的,多看看書上的介紹你就可以發(fā)現(xiàn),幾乎所有的標(biāo)準(zhǔn)曲線都是建立一種目標(biāo)產(chǎn)物濃度與檢測(cè)值之間的關(guān)系,從而能根據(jù)實(shí)際樣品的檢測(cè)值來(lái)計(jì)算目標(biāo)產(chǎn)物濃度,呵呵 |

金蟲 (正式寫手)
| 你的吸光度值【A】不能直接用作求算最大反應(yīng)速度的參數(shù),而是應(yīng)該轉(zhuǎn)換成產(chǎn)物濃度【Y】mol/L(這一步用標(biāo)準(zhǔn)曲線就可以得出),通過(guò)短時(shí)間t內(nèi)的產(chǎn)物濃度的變化求出初反應(yīng)速度r0,(mol/L.s)。假設(shè)你的底物濃度為【S】,則將底物濃度的倒數(shù)1/[S]作為橫坐標(biāo),將反應(yīng)初速度的倒數(shù)1/r0作為縱坐標(biāo)作圖,做出來(lái)的圖上面就有最大反應(yīng)速度和米氏常數(shù)這類的參數(shù)了,單位就是mol/(L.s) |

木蟲 (正式寫手)
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非常謝謝你的回答。方法是對(duì)的?墒怯幸稽c(diǎn)還不明白。由A轉(zhuǎn)換為濃度時(shí)由標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)計(jì)算產(chǎn)物濃度。關(guān)鍵是這個(gè)產(chǎn)物濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線如何制得?還是用同一組數(shù)據(jù)? 如HRP對(duì)TMB底物的米氏常數(shù)和最大反應(yīng)速度: TMB濃度 Absorbance 1 0.034 2 ..... 3 ..... 4 5 6 產(chǎn)物的濃度如何得到?測(cè)得A是底物氧化后產(chǎn)物的,是否由化學(xué)反應(yīng)方程式得出。這樣一來(lái)吸光度數(shù)值就沒有用了。 是否有其它轉(zhuǎn)換方法呢?用吸光度肯定不對(duì),否則計(jì)算單位不對(duì)。 |
木蟲 (正式寫手)
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