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xjx11228木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[交流]
如何求酶促反應(yīng)中最大反應(yīng)速度？單位是什么？
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問(wèn)題：對(duì)于一個(gè)酶促反應(yīng)，通常由米氏方程求米氏常數(shù)和最大反應(yīng)速度以及催化反轉(zhuǎn)常數(shù)，可是有關(guān)數(shù)據(jù)只是底物一系列濃度及所對(duì)應(yīng)的吸光度值，請(qǐng)問(wèn)如何求出米氏常數(shù)？尤其是這個(gè)最大反應(yīng)速度的單位不好確定？ 我是不是還缺少條件？文獻(xiàn)都是10^-8 M s^-1,這個(gè)如何得出？謝謝各位了。 [ Last edited by xjx11228 on 2010-6-9 at 16:34 ] |
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xjx11228(金幣+3, 博學(xué)EPI+1): 2010-06-12 19:22:24
| 你的吸光度值【A】不能直接用作求算最大反應(yīng)速度的參數(shù)，而是應(yīng)該轉(zhuǎn)換成產(chǎn)物濃度【Y】mol/L（這一步用標(biāo)準(zhǔn)曲線就可以得出），通過(guò)短時(shí)間t內(nèi)的產(chǎn)物濃度的變化求出初反應(yīng)速度r0,(mol/L.s)。假設(shè)你的底物濃度為【S】，則將底物濃度的倒數(shù)1/[S]作為橫坐標(biāo)，將反應(yīng)初速度的倒數(shù)1/r0作為縱坐標(biāo)作圖，做出來(lái)的圖上面就有最大反應(yīng)速度和米氏常數(shù)這類(lèi)的參數(shù)了，單位就是mol/(L.s) |
2樓2010-06-11 09:37:53
xjx11228
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非常謝謝你的回答。方法是對(duì)的。可是有一點(diǎn)還不明白。由A轉(zhuǎn)換為濃度時(shí)由標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)計(jì)算產(chǎn)物濃度。關(guān)鍵是這個(gè)產(chǎn)物濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線如何制得？還是用同一組數(shù)據(jù)? 如HRP對(duì)TMB底物的米氏常數(shù)和最大反應(yīng)速度： TMB濃度 Absorbance 1 0.034 2 ..... 3 ..... 4 5 6 產(chǎn)物的濃度如何得到？測(cè)得A是底物氧化后產(chǎn)物的，是否由化學(xué)反應(yīng)方程式得出。這樣一來(lái)吸光度數(shù)值就沒(méi)有用了。 是否有其它轉(zhuǎn)換方法呢？用吸光度肯定不對(duì)，否則計(jì)算單位不對(duì)。 |
3樓2010-06-12 19:20:41
xjx11228
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4樓2010-06-13 09:55:07
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所謂的標(biāo)準(zhǔn)曲線就是你的產(chǎn)物Y的濃度在你那臺(tái)分光光度計(jì)上的吸光值A(chǔ)之間的對(duì)應(yīng)關(guān)系，其實(shí)跟你的底物濃度沒(méi)有關(guān)系。也就是你配置一定濃度的產(chǎn)物（這個(gè)需要用純品，分析純的即可），測(cè)定每個(gè)濃度下的吸光值，做一條直線，就是你的標(biāo)準(zhǔn)曲線，就是說(shuō)產(chǎn)物濃度Y和吸光值A(chǔ)之間形成了一種關(guān)系：A=a+bY，這樣你用你的底物反應(yīng)完之后的反應(yīng)液測(cè)得的吸光度，實(shí)際上對(duì)應(yīng)著你的反應(yīng)液里有多少產(chǎn)物，根據(jù)你標(biāo)準(zhǔn)曲線的方程計(jì)算就出來(lái)了，這樣吸光值不就有用了嗎�？偨Y(jié)來(lái)說(shuō)，標(biāo)準(zhǔn)曲線就是建立一個(gè)吸光值與產(chǎn)物濃度的關(guān)系，明白了嗎？ 這種標(biāo)準(zhǔn)曲線的做法是放之四海而皆準(zhǔn)的，多看看書(shū)上的介紹你就可以發(fā)現(xiàn)，幾乎所有的標(biāo)準(zhǔn)曲線都是建立一種目標(biāo)產(chǎn)物濃度與檢測(cè)值之間的關(guān)系，從而能根據(jù)實(shí)際樣品的檢測(cè)值來(lái)計(jì)算目標(biāo)產(chǎn)物濃度，呵呵 |
5樓2010-06-13 09:57:22
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xjx11228(金幣+3): 2010-06-13 12:38:19
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補(bǔ)充一點(diǎn)，你只需要測(cè)定一條標(biāo)準(zhǔn)曲線（一系列濃度的產(chǎn)物濃度和吸光值的關(guān)系）A=a+bY 然后根據(jù)你舉的例子中的吸光值計(jì)算出對(duì)應(yīng)的一系列產(chǎn)物濃度，即可得到： TMB濃度 產(chǎn)物濃度 1 Y1 2 Y2 …… 如果你以TMB為底物的時(shí)間夠短的話（設(shè)為t），則你需要求算米氏常數(shù)的反應(yīng)初速度為Y/t, 單位mol/(L.s)，對(duì)應(yīng)不同的底物濃度，就對(duì)應(yīng)有一定的反應(yīng)初速度，則： TMB R 1 r1 2 r2 …… 再往下你就會(huì)了吧 |
6樓2010-06-13 10:07:25
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7樓2010-06-13 12:37:47
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8樓2010-06-13 13:04:59
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9樓2010-06-13 16:18:28
10樓2012-05-13 19:01:59
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