泡泡9706

Originally posted by zemin_fang at 2010-06-15 08:13:23:
不知道樓主加入外源基因信號(hào)肽的目的是什么，一般表達(dá)用載體自身的信號(hào)肽不是可以嗎？外源信號(hào)肽如果大腸桿菌不能識(shí)別蛋白會(huì)形成包涵體的。

引物是我上屆師兄設(shè)計(jì)的，當(dāng)時(shí)我剛接觸，就接著做了。他把載體自帶的信號(hào)肽切掉了，插入的是帶有信號(hào)肽的全序列�，F(xiàn)在表達(dá)出來(lái)了，產(chǎn)生包涵體，但我優(yōu)化條件后也能產(chǎn)一部分可溶蛋白了。我想問(wèn)這部分蛋白有沒有可能切掉信號(hào)肽進(jìn)入周質(zhì)空間呢？

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9樓2010-06-17 17:02:45

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zemin_fang

木蟲 (正式寫手)

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lstt09nk(金幣+1):歡迎多多交流~~ 2010-06-17 21:24:17

引用回帖:

Originally posted by 泡泡9706 at 2010-06-17 17:02:45:

引物是我上屆師兄設(shè)計(jì)的，當(dāng)時(shí)我剛接觸，就接著做了。他把載體自帶的信號(hào)肽切掉了，插入的是帶有信號(hào)肽的全序列�，F(xiàn)在表達(dá)出來(lái)了，產(chǎn)生包涵體，但我優(yōu)化條件后也能產(chǎn)一部分可溶蛋白了。我想問(wèn)這部分蛋白有沒有可 ...

帶上基因自身的信號(hào)肽形成包涵體的幾率非常大，而且大腸桿菌不一定能識(shí)別，蛋白進(jìn)入周知空間也就不可能了。
如果要驗(yàn)證，可以用溶菌酶破解細(xì)胞壁然后收集上清SDS-PAGE電泳檢測(cè)或測(cè)定酶活力。

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10樓2010-06-17 20:12:29

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