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julia0708木蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助/交流】關(guān)于質(zhì)粒構(gòu)建與表達(dá)的問題 已有12人參與
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本人是化學(xué)的，實(shí)驗(yàn)室最近申請到了一個(gè)生物方面的課題，所以有很多的問題都弄不懂，需要向大家請教一下。先謝過大家了。 按照課題的設(shè)想，我們需要先得到一種蛋白，然后在體外做它和一些配體的相互作用。所以現(xiàn)在問題的難點(diǎn)是在蛋白的獲得的身上。 目前我們想到的方法是通過構(gòu)建質(zhì)粒然后進(jìn)行表達(dá)來獲得。 但是在構(gòu)建的時(shí)候又有了一些問題。 大概整理了一下，如下： 首先，我們的蛋白是在人和哺乳動(dòng)物中存在的蛋白，如果要獲得這種蛋白，是不是用最常用的大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)無法獲得有活性的蛋白？ 其次，我們的目的是為了考察蛋白和配體的結(jié)合情況，如果這樣的話，是不是只要能夠保證其蛋白LBD區(qū)域的活性就可以了呢？看到有文獻(xiàn)報(bào)道在大腸桿菌系統(tǒng)中表達(dá)了該蛋白的LBD的部分，這個(gè)是不是就可以達(dá)到我們的目的呢？這樣的蛋白是不是具有活性的蛋白？ 另外，還有個(gè)問題想問一下，如果已知蛋白的氨基酸序列，是否可以用序列合成儀來合成蛋白？這樣的蛋白能否保證活性呢？和之前通過質(zhì)粒構(gòu)建表達(dá)的方法相比，兩者所需要的成本哪個(gè)更高一些？ 很多問題不是很懂，說出來也很混亂，希望大家能幫忙解答下，謝謝大家！ |
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silicare
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2樓2010-05-12 17:38:43
wordsworth3180
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3樓2010-05-12 20:01:03
★ ★ ★ ★ ★ ★
julia0708(金幣+1):謝謝參與
scelab(金幣+5):熱心蟲友，歡迎多來交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-05-12 23:21:39
julia0708(金幣+5):豁然開朗，非常感謝！ 2010-05-13 11:16:30
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julia0708(金幣+5):豁然開朗，非常感謝！ 2010-05-13 11:16:30
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簡單試著回答 首先，我們的蛋白是在人和哺乳動(dòng)物中存在的蛋白，如果要獲得這種蛋白，是不是用最常用的大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)無法獲得有活性的蛋白？ 這個(gè)不一定，有時(shí)候是可以的，有時(shí)候得用別的表達(dá)系統(tǒng)，如真核表達(dá)系統(tǒng)。 其次，我們的目的是為了考察蛋白和配體的結(jié)合情況，如果這樣的話，是不是只要能夠保證其蛋白LBD區(qū)域的活性就可以了呢？看到有文獻(xiàn)報(bào)道在大腸桿菌系統(tǒng)中表達(dá)了該蛋白的LBD的部分，這個(gè)是不是就可以達(dá)到我們的目的呢？這樣的蛋白是不是具有活性的蛋白？ LBD不知道什么意思，我理解是結(jié)合區(qū)域和活性區(qū)域，只表達(dá)結(jié)合區(qū)域肯定是沒有活性的，但是有結(jié)合活性。 另外，還有個(gè)問題想問一下，如果已知蛋白的氨基酸序列，是否可以用序列合成儀來合成蛋白？這樣的蛋白能否保證活性呢？和之前通過質(zhì)粒構(gòu)建表達(dá)的方法相比，兩者所需要的成本哪個(gè)更高一些？ 當(dāng)然全序列合成價(jià)格高，不過現(xiàn)在也在1萬左右吧，質(zhì)粒克隆 表達(dá)的話熟手只需要幾百塊。 |
4樓2010-05-12 21:03:35
julia0708
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