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dxhly銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于SiRNA表達(dá)載體構(gòu)建的問題
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請(qǐng)各位高人指點(diǎn)一下，我在構(gòu)建SiRNA表達(dá)載體時(shí)遇到一個(gè)問題，在酶切空載體凝膠電泳膠回收純化后，線性載體與目的片段按1:10的比例進(jìn)行連接，轉(zhuǎn)化DH5a感受態(tài)細(xì)菌后，在含卡那霉素的培養(yǎng)板上能夠長(zhǎng)出多個(gè)單菌落，但是每次提取質(zhì)粒鑒定時(shí)，所提取的質(zhì)粒遠(yuǎn)大于8.8Kb左右的目的質(zhì)粒（見圖）。做了很多次都是這樣，很郁悶，只有一次構(gòu)建成功并測(cè)序正確。所用的試劑盒：Sfi-I限制性內(nèi)切酶、T4連接酶為NEB,膠回收純化試劑盒為PROMEGA。 望各位高人指點(diǎn)，不勝感激！ |
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ganchao1776
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2樓2011-08-22 09:57:43
dxhly
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3樓2011-08-25 23:20:10
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4樓2011-08-26 00:43:31
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6樓2011-08-30 09:49:52
dxhly
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謝謝你們！ 7樓2011-08-31 15:20:35
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8樓2011-08-31 17:00:10
qincaifan
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9樓2011-09-23 09:12:02
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你可以重新提質(zhì)粒酶切，盡量使質(zhì)粒酶切完全。 可以委托北京英茂盛業(yè)生物公司做載體構(gòu)建，他們很有經(jīng)驗(yàn)。 http://www.inovogen.com/cp/shRNAvector/ |
10樓2012-03-09 10:39:09
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