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dxhly銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于SiRNA表達載體構(gòu)建的問題
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請各位高人指點一下，我在構(gòu)建SiRNA表達載體時遇到一個問題，在酶切空載體凝膠電泳膠回收純化后，線性載體與目的片段按1:10的比例進行連接，轉(zhuǎn)化DH5a感受態(tài)細菌后，在含卡那霉素的培養(yǎng)板上能夠長出多個單菌落，但是每次提取質(zhì)粒鑒定時，所提取的質(zhì)粒遠大于8.8Kb左右的目的質(zhì)粒（見圖）。做了很多次都是這樣，很郁悶，只有一次構(gòu)建成功并測序正確。所用的試劑盒：Sfi-I限制性內(nèi)切酶、T4連接酶為NEB,膠回收純化試劑盒為PROMEGA。 望各位高人指點，不勝感激！ |
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ganchao1776
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4樓2011-08-26 00:43:31
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5樓2011-08-26 10:47:24
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6樓2011-08-30 09:49:52
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謝謝你們！ 7樓2011-08-31 15:20:35
8樓2011-08-31 17:00:10
qincaifan
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9樓2011-09-23 09:12:02
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你可以重新提質(zhì)粒酶切，盡量使質(zhì)粒酶切完全。 可以委托北京英茂盛業(yè)生物公司做載體構(gòu)建，他們很有經(jīng)驗。 http://www.inovogen.com/cp/shRNAvector/ |
10樓2012-03-09 10:39:09
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