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dxhly銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于SiRNA表達(dá)載體構(gòu)建的問題
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請各位高人指點一下，我在構(gòu)建SiRNA表達(dá)載體時遇到一個問題，在酶切空載體凝膠電泳膠回收純化后，線性載體與目的片段按1:10的比例進(jìn)行連接，轉(zhuǎn)化DH5a感受態(tài)細(xì)菌后，在含卡那霉素的培養(yǎng)板上能夠長出多個單菌落，但是每次提取質(zhì)粒鑒定時，所提取的質(zhì)粒遠(yuǎn)大于8.8Kb左右的目的質(zhì)粒（見圖）。做了很多次都是這樣，很郁悶，只有一次構(gòu)建成功并測序正確。所用的試劑盒：Sfi-I限制性內(nèi)切酶、T4連接酶為NEB,膠回收純化試劑盒為PROMEGA。 望各位高人指點，不勝感激！ |
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qincaifan
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9樓2011-09-23 09:12:02
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5樓2011-08-26 10:47:24
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