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jinling158銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】相對定量可以不做標準曲線嗎 已有3人參與
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本人想做real time PCR, 做測試菌株和參照菌株之間A基因的表達差異，看了很多資料之后，覺得沒有必要做標準曲線，原因如下： 目前主要用兩種方法進行相對定量，其中之一是2－△△Ct法，該法前提是目的基因和參照基因有相同的擴增效率且接近100%；我認為用這種方法需要做標準曲線來看一下目的基因和參照基因的擴增效率是否相同。 另外一種方法是Pfaffl法，這種方法應用的前提是單個基因（目的基因和參照基因）在試驗樣本和標準樣本中有相同的擴增效率，但不要求目的基因和參照基因有相同的擴增效率。但是用這種方法要知道目的基因和參照基因的擴增效率，請問一下做過的同學，如果不做標準曲線的話怎么知道目的基因和參照基因的擴增效率呢？另外，怎么確定單個基因在不同樣本之間具有相同的擴增效率呢？ 希望做過的童鞋發(fā)表一下您的高見，謝謝！ [ Last edited by jinling158 on 2010-7-2 at 17:37 ] |
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