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jinling158銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】相對(duì)定量可以不做標(biāo)準(zhǔn)曲線嗎 已有3人參與
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本人想做real time PCR, 做測(cè)試菌株和參照菌株之間A基因的表達(dá)差異，看了很多資料之后，覺(jué)得沒(méi)有必要做標(biāo)準(zhǔn)曲線，原因如下： 目前主要用兩種方法進(jìn)行相對(duì)定量，其中之一是2－△△Ct法，該法前提是目的基因和參照基因有相同的擴(kuò)增效率且接近100%；我認(rèn)為用這種方法需要做標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)看一下目的基因和參照基因的擴(kuò)增效率是否相同。 另外一種方法是Pfaffl法，這種方法應(yīng)用的前提是單個(gè)基因（目的基因和參照基因）在試驗(yàn)樣本和標(biāo)準(zhǔn)樣本中有相同的擴(kuò)增效率，但不要求目的基因和參照基因有相同的擴(kuò)增效率。但是用這種方法要知道目的基因和參照基因的擴(kuò)增效率，請(qǐng)問(wèn)一下做過(guò)的同學(xué)，如果不做標(biāo)準(zhǔn)曲線的話怎么知道目的基因和參照基因的擴(kuò)增效率呢？另外，怎么確定單個(gè)基因在不同樣本之間具有相同的擴(kuò)增效率呢？ 希望做過(guò)的童鞋發(fā)表一下您的高見，謝謝！ [ Last edited by jinling158 on 2010-7-2 at 17:37 ] |
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2樓2010-06-29 20:50:24
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