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ruisangliu

金蟲 (正式寫手)


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多糖含量,不是用濃硫酸苯酚法嗎?
11樓2010-07-08 18:41:09
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12樓2010-07-08 20:30:07
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songzi1030

新蟲 (初入文壇)

直接滴定法測多糖

引用回帖:
Originally posted by ruisangliu at 2010-07-08 18:41:09:
多糖含量,不是用濃硫酸苯酚法嗎?

對,但是我測得多糖里含有很多離子,加入硫酸后會發(fā)生反應,干擾很大,試過這個方法后不行,所以才用別的方法
13樓2010-07-09 10:30:28
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禹森319

金蟲 (小有名氣)


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我也特別想知道測粗多糖中多糖含量應該具體采用什么方法!
14樓2010-09-06 20:34:07
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lwb1987521

木蟲 (正式寫手)


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多糖含量測定
關(guān)于多糖含量測定,業(yè)內(nèi)有兩種評價方法。一種是狹義上嚴格的多糖測定,即水提取多糖后,以凝膠色譜柱分離、洗脫提純粗多糖得到較單一分子量的多糖,再水解成各種單糖,以HPLC法分離測定各單糖,即可得到比較嚴格意義上的多糖含量及其組成。這種方法是科研級的多糖測定。
另一種評價方法一般是生產(chǎn)企業(yè)用于質(zhì)控的多糖測定:一般過程是水提醇沉粗多糖后,以葡萄糖作為相比較的物質(zhì),加入特定顯色劑后比色測定粗多糖的含量。注意,這種方法測得的是以葡萄糖作為折算的多糖含量。但這種評價方法簡單實用,能反映一定的質(zhì)量指標,作為質(zhì)控之用可以的了。包括中國藥典和一些國標、行標都采用此方法評價多糖含量,方法大同小異,如硫酸-苯酚法,硫酸-蒽酮法。但根據(jù)不少實際檢驗人的反映,要想檢測結(jié)果有很好的重現(xiàn)性,還是有很多細節(jié)問題要注意的。
以下是本人親自做過的方法過程,覺得重現(xiàn)性和準確性都不錯的。因為不同的檢驗室檢驗工具不太一樣,大家可以實事求是作變通。但要充分認識本檢驗方法的原理,過程要避免干擾哦。可以找本《中藥化學》看看。
中藥總多糖含量測定(苯酚-硫酸比色法)
供試品溶液的制備:①提取上清液:精密稱取樣品細粉2.2g(約相當于多糖0.22g),置燒瓶中,加水100ml置電爐上加熱回流提取1.5h,放冷至室溫,3000~4000rpm離心10min,收集上清液,用少量水分次洗滌燒瓶及離心管,同樣離心收集上清液。
②提取多糖沉淀:合并全部上清液置蒸發(fā)皿中,置電爐上小心加熱(避免焦化)濃縮到約15ml,放冷至室溫,加乙醇100ml,攪勻,放置使其沉淀15分鐘。轉(zhuǎn)移此溶液連同沉淀于離心管中,繼續(xù)用少量80%乙醇以玻棒充分刮洗蒸發(fā)皿,洗液和沉淀同樣轉(zhuǎn)移至離心管中,以3000~4000rpm速度離心15min,棄去上清液,在離心管中加入少量80%乙醇,輕輕洗滌,同樣離心棄去上清液(保留沉淀物)。
然后將離心管(連同沉淀物)于50℃烘箱揮干乙醇(不能見到任何液體),然后加熱水溶解沉淀,轉(zhuǎn)移至250ml量瓶中,繼續(xù)用熱水以玻棒充分刮洗離心管,洗液同樣轉(zhuǎn)移至250ml量瓶中,放冷至室溫,用水定容至刻度,搖勻,精密量取5ml置100ml量瓶中,用水定容至刻度,搖勻即得供試品溶液。
標準曲線的制作:精密稱取105℃干燥至恒重的無水葡萄糖適量,加水配制成0.85mg/ml的貯備液。精密吸取1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 ml分別置于50ml量瓶中加水定容至刻度,搖勻得葡萄糖稀釋液。再分別精密量取上述各稀釋液2 ml置具塞試管中,同時精密量取水2.0 ml置另一具塞試管中,各管分別加5%苯酚溶液(新制)1 ml,搖勻,然后迅速加入濃硫酸5.0ml,立即搖勻,于40℃水浴中保溫30min,取出,置冰水浴中5 min。以上述2.0ml水所制得的空白溶液做參比,于489nm波長處測定各溶液吸收度,以葡萄糖稀釋液的濃度(μg/ml)為橫坐標,吸收度為縱坐標,繪制標準曲線。備注:在準確度要求不很高時,可用對照品一點法代替標準曲線,即對照品只做一個點(精密取5.0ml葡萄糖貯備液稀釋至100ml得葡萄糖稀釋液,然后進行苯酚-硫酸反應,測定吸收度)。
樣品測定:取供試品溶液2.0ml置具塞試管中,按“標準曲線的制作”項下同法加苯酚溶液和濃硫酸,測定吸收度。根據(jù)樣品吸收度從標準曲線上讀取葡萄糖濃度,再計算出樣品中總多糖的含量(以葡萄糖計)。備注:如果采用對照品一點法,則根據(jù)吸收度比值計算樣品中總多糖的含量。
15樓2010-09-07 09:01:54
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lwb1987521

木蟲 (正式寫手)

粗多糖測定
多糖的測定方法,目前有堿性酒石酸銅滴定法、比色法(蒽酮比色法、硫酸-苯酚法)。一般說來,比色法的優(yōu)點是靈敏度高,達到µg/ml(滴定法一般為mg/ml),樣品用量少;但缺點是一般做常規(guī)檢測時使用葡萄糖作標準品,誤差較大,應以被測物的純品作對照品,以求出換算因子,但要制備被測物的純品并非每個實驗室所能做到的,而且保健食品中往往是多種中草藥的提取物作為原料而制成,所含多糖是不同相對分子量多糖的混合體,這就給提取純品增加了難度。所以當成品中多糖含量大于1%(質(zhì)量濃度)時,最好選用堿性酒石酸銅滴定。
  滴定法
    1.樣品預處理
取本品適量,精密稱定,置于250ml磨口燒瓶中,精密加水50ml,稱定重量,置沸水浴回流2小時,放置至室溫,用水補足減失重量,混勻,濾過,精密吸取續(xù)濾液15ml于100ml離心管中,加無水乙醇75ml,混勻,以4000r/min離心10min,并小心棄去上清液,再加15ml熱水(溫度>90℃)沖洗離心管中沉淀物,重復一次后再以4000r/min離心30min,棄去上清液,沉淀用乙醇液(水:乙醇=15:75)洗滌兩次,離心,棄去洗滌液。
2.樣品水解
將離心管中醇析物用50ml熱水(溫度>90℃)少量多次轉(zhuǎn)移至250ml磨口三角瓶中,加入15ml濃鹽酸,開啟冷凝管,在沸水浴中回流2h,冷卻,先用40%的氫氧化鈉(約15ml)粗調(diào)Ph值,后用稀的氫氧化鈉溶液細調(diào),再置于PH計上調(diào)整pH在6.8~7.2之間。將中和的酸解液移置至100ml容量瓶中,加水定容至刻度,搖勻,過濾,濾液供滴定用。
3.堿性酒石酸鉀鈉銅溶液標定
3.1精密吸取堿性酒石酸銅甲、乙液各5ml于150ml的錐形瓶中,加10ml蒸餾水及2粒玻璃珠,用滴定管加入9.0ml葡萄糖標準溶液于錐形瓶中。
3.2將錐形瓶置電爐上迅速加熱,務必在2分鐘內(nèi)至沸,并保持溶液在微沸狀態(tài)下再用標準葡萄糖溶液滴定,以每2秒1滴的速度滴定至藍色剛好褪去為終點,記錄消耗葡萄糖標準溶液的總體積。同法平行操作三份,取其平均值(V1)。
3.3樣品溶液預測和測定。
3.3.1 樣品溶液的預測
精密吸取堿性酒石酸銅甲、乙液各5ml于150ml的錐形瓶中,精密加入10ml蒸餾水及2粒玻璃珠,控制在2分鐘內(nèi)加熱至沸,保持溶液在微沸狀態(tài)下以先快后慢的速度,從滴定管中滴加樣品水解液液進行滴定,直至溶液藍色剛好褪去為終點,記錄葡萄糖標準溶液消耗體積。
3.3.2樣品溶液的測定
精密吸取堿性酒石酸銅甲液與乙液各5.0ml,置于150ml錐形瓶中,精密加入蒸餾水10ml及玻璃珠2粒,從滴定管滴加比預測體積少1ml的樣品水解液,將錐形瓶置電爐上迅速加熱,務必在2分鐘內(nèi)至沸,并保持溶液在微沸狀態(tài)下再用樣品水解液滴定,以每2秒1滴的速度滴定至藍色剛好褪去為終點,記錄消耗葡萄糖標準溶液的總體積。同法平行操作三份,得出平均消耗體積(V2)。
最后計算結(jié)果乘以0.9,此為葡萄糖換算成粗多糖的細數(shù)。

我比較過這三種方法:滴定法和硫酸-苯酚法重復性都還可以,關(guān)鍵是試驗操作人員要充分理解試驗步驟,注意細節(jié)。滴定法主要就是離心、洗滌、滴定。硫酸-苯酚法如果也是采用醇沉得到多糖,操作步驟也是注意離心、和洗滌除去單糖;如果是用堿性二價銅試劑選擇性地從高分子中沉淀具有葡聚糖結(jié)構(gòu)的多糖,用苯酚-硫酸法測定,需要注意的事項:在沉淀葡聚糖時盡量使被沉淀液里粗多糖的含量高些,然后在測定環(huán)節(jié)再稀釋回適合濃度,這樣可減少損失帶來的誤差,便于得到好的重復性;還有就是這一環(huán)節(jié)好多國標或文獻給出的離心參數(shù)是3000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘,試驗過程中發(fā)現(xiàn)這個參數(shù)不合理,離心下來的沉淀在傾出上清液時會丟失,這也是好多試驗人員說這個方法重復性不好的原因之一,參數(shù)應為4000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘。蒽酮比色法不適合保健食品中多糖測定,應為這種方法需要測定液必須清澈透明,加熱后不應該有沉淀;還有測定過程中所用蒽酮試劑中硫酸的濃度、取樣液量、蒽酮試劑用量、沸水浴中反應時間,這幾個操作條件的控制對試驗結(jié)果影響很大,而且這幾個條件之間是有聯(lián)系的。不適合大生產(chǎn)檢驗。

以上資料均源自http://bbs.foodmate.net/viewthre ... p;extra=&page=2請參考
16樓2010-09-07 09:02:23
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左岸煙

新蟲 (初入文壇)


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引用回帖:
15樓: Originally posted by lwb1987521 at 2010-09-07 09:01:54:
多糖含量測定
關(guān)于多糖含量測定,業(yè)內(nèi)有兩種評價方法。一種是狹義上嚴格的多糖測定,即水提取多糖后,以凝膠色譜柱分離、洗脫提純粗多糖得到較單一分子量的多糖,再水解成各種單糖,以HPLC法分離測定各單糖,即可 ...

為什么要熱水浴后再冰?
17樓2012-02-20 08:47:12
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