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quinn鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
【求助/交流】關(guān)于硫酸銨沉淀的問(wèn)題 已有7人參與
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| 我在做酶純化，先把發(fā)酵液硫酸銨分級(jí)沉淀，結(jié)果每一級(jí)都有活性，也有蛋白，比活都差不多，一點(diǎn)都沒(méi)分開(kāi)。于是我又把分級(jí)的沉淀合并過(guò)超濾膜，先過(guò)的十萬(wàn)的膜，結(jié)果蛋白都在十萬(wàn)以上，十萬(wàn)以下幾乎什么都沒(méi)有。我覺(jué)得這個(gè)結(jié)果有問(wèn)題，怎么可能兩種方法都一點(diǎn)效果都沒(méi)有。而且發(fā)酵液里怎么會(huì)沒(méi)有十萬(wàn)以下的蛋白呢？這到底是為什么呢？親們，誰(shuí)能告訴我呀，或者有誰(shuí)有過(guò)同樣的情況啊！ |
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2樓2010-07-06 10:25:32
很想跟你走
鐵蟲(chóng) (小有名氣)
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lstt09nk(金幣+2):很詳細(xì)，感謝交流~~ 2010-07-09 17:06:32
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先說(shuō)硫酸銨沉淀 你可以先做個(gè)小試：將樣品分成五等分，每等份分別加入20%、30%40%、50%、60%的硫酸銨。取上清去沉淀，然后再分別往上清中加入硫酸銨至：30%、40%、50%、60%、70%。取沉淀再溶解測(cè)活性。這樣就能大致清楚你所需要蛋白的沉淀濃度了。 關(guān)于超濾也有很多實(shí)際問(wèn)題。超濾膜給出的分子量數(shù)值只是一個(gè)大致的范圍，它不可能分的很準(zhǔn)確，一般要選擇比目標(biāo)蛋白大2-3倍左右的膜來(lái)分離。比如你所需要分離的蛋白分子量有5萬(wàn)，那么你就要選擇10萬(wàn)-15萬(wàn)的膜。 樓主所說(shuō)的將分級(jí)沉淀合并過(guò)10萬(wàn)膜，很有可能過(guò)下去的分子量都在5萬(wàn)以下，甚至更低，結(jié)合你自己的實(shí)驗(yàn)條件，你的發(fā)酵液里小分子量蛋白可能比較少。 |
3樓2010-07-09 16:06:38
劉小樂(lè)
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4樓2010-07-12 12:53:39
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6樓2010-07-12 16:09:36
quinn
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7樓2010-07-17 13:52:07
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8樓2011-01-13 22:04:03
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