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[交流]
【求助/交流】關于硫酸銨沉淀的問題 已有7人參與
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| 我在做酶純化，先把發(fā)酵液硫酸銨分級沉淀，結果每一級都有活性，也有蛋白，比活都差不多，一點都沒分開。于是我又把分級的沉淀合并過超濾膜，先過的十萬的膜，結果蛋白都在十萬以上，十萬以下幾乎什么都沒有。我覺得這個結果有問題，怎么可能兩種方法都一點效果都沒有。而且發(fā)酵液里怎么會沒有十萬以下的蛋白呢？這到底是為什么呢？親們，誰能告訴我呀，或者有誰有過同樣的情況��！ |
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劉小樂
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
lstt09nk(金幣+2):很詳細，感謝交流~~ 2010-07-09 17:06:32
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先說硫酸銨沉淀 你可以先做個小試：將樣品分成五等分，每等份分別加入20%、30%40%、50%、60%的硫酸銨。取上清去沉淀，然后再分別往上清中加入硫酸銨至：30%、40%、50%、60%、70%。取沉淀再溶解測活性。這樣就能大致清楚你所需要蛋白的沉淀濃度了。 關于超濾也有很多實際問題。超濾膜給出的分子量數(shù)值只是一個大致的范圍，它不可能分的很準確，一般要選擇比目標蛋白大2-3倍左右的膜來分離。比如你所需要分離的蛋白分子量有5萬，那么你就要選擇10萬-15萬的膜。 樓主所說的將分級沉淀合并過10萬膜，很有可能過下去的分子量都在5萬以下，甚至更低，結合你自己的實驗條件，你的發(fā)酵液里小分子量蛋白可能比較少。 |
3樓2010-07-09 16:06:38
5樓2010-07-12 15:29:20
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