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changes木蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助/交流】求分享葉盤法根癌農(nóng)桿菌農(nóng)桿菌介導的煙草轉(zhuǎn)化體系 已有1人參與
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求大家分享。做這個好幾批了,可是長的都不好,沒有獲得抗性株,抗性芽一移栽就死了,也不知是抗性芽為假陽性還是培養(yǎng)基出了問題,亦或是篩選比較不對? 我們用的是pCAMBIA1301載體,潮霉素篩選的。 大家有比較成熟的煙草轉(zhuǎn)化體系請分享下吧。越詳細越好, 1.所用的質(zhì)粒、篩選用抗生素? 2.葉盤大小,葉盤部位選擇,愈傷組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方、培養(yǎng)天數(shù)、溫度、光周期? 3.農(nóng)桿菌的濃度(OD值達到多少?),侵染液配方、pH值、侵染時間? 4.共培養(yǎng)條件、時間,所用培養(yǎng)基? 5.分化培養(yǎng)的培養(yǎng)基、溫度、光周期、大約多長時間能長出抗性芽?農(nóng)桿菌如何抑制? 6.抗性芽長至多大時轉(zhuǎn)至生根培養(yǎng)基?如何分離抗性芽、直接用鑷子夾下嗎?生根培養(yǎng)基配方? 謝謝大家,實在是沒轍了。我在北京,我們實驗室以前沒做過這些,現(xiàn)在做起來太費勁了。請大家?guī)兔Α? |
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