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changes木蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助/交流】求分享葉盤法根癌農(nóng)桿菌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草轉(zhuǎn)化體系 已有1人參與
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求大家分享。做這個(gè)好幾批了，可是長的都不好，沒有獲得抗性株，抗性芽一移栽就死了，也不知是抗性芽為假陽性還是培養(yǎng)基出了問題，亦或是篩選比較不對？ 我們用的是pCAMBIA1301載體，潮霉素篩選的。 大家有比較成熟的煙草轉(zhuǎn)化體系請分享下吧。越詳細(xì)越好， 1.所用的質(zhì)粒、篩選用抗生素？ 2.葉盤大小，葉盤部位選擇，愈傷組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方、培養(yǎng)天數(shù)、溫度、光周期？ 3.農(nóng)桿菌的濃度（OD值達(dá)到多少？），侵染液配方、pH值、侵染時(shí)間？ 4.共培養(yǎng)條件、時(shí)間，所用培養(yǎng)基？ 5.分化培養(yǎng)的培養(yǎng)基、溫度、光周期、大約多長時(shí)間能長出抗性芽？農(nóng)桿菌如何抑制？ 6.抗性芽長至多大時(shí)轉(zhuǎn)至生根培養(yǎng)基？如何分離抗性芽、直接用鑷子夾下嗎？生根培養(yǎng)基配方？ 謝謝大家，實(shí)在是沒轍了。我在北京，我們實(shí)驗(yàn)室以前沒做過這些，現(xiàn)在做起來太費(fèi)勁了。請大家?guī)兔Α? |
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2樓2010-07-21 15:09:25
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