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shaojing690新蟲 (初入文壇)
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【分享】分子生物學實驗常用試劑、緩沖液的配制方法 已有49人參與
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分子生物學實驗常用試劑、緩沖液的配制方法 1、1M Tris-HCl □組份濃度 1 M Tris-HCl （pH7.4，7.6，8.0） □配制量 1L □配制方法 1. 稱量121.1gTris置于1L燒杯中。 2. 加入約800mL的去離子水，充分攪拌溶解。 3. 按下表量加入濃鹽酸調節(jié)所需要的pH值。 pH值 濃HCl 7.4 約70mL 7.6 約60mL 8.0 約42mL 4. 將溶解定容至1L。 5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。 注意：應使溶液冷卻至室溫后再調定pH值，因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差很大，溫度每升高1℃，溶液的pH值大約降低0.03個單位。 2、1.5 M Tris-HCl □組份濃度 1.5 M Tris-HCl （pH8.8） □配制量 1L □配制方法 1.稱取181.7gTris置于1L燒杯中。 2. 加入約800mL的去離子水，充分攪拌溶解。 3. 用濃鹽酸調pH值至8.8。 4. 將溶液定容至1L。 5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。 注意：應使溶液冷卻至室溫后再調定pH值，因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1℃，溶液的pH值大約降低0.03個單位。 3、10×TE Buffer □組份濃度 100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0） □配制量 1L □配制方法 1. 量取下列溶液，置于1L燒杯中。 1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0） 100mL 500 mM EDTA（pH8.0） 20mL 2. 向燒杯中加入約800mL的去離子水，均勻混合。 3. 將溶液定至1L后，高溫高壓滅菌。 4. 室溫保存。 4、3 M醋酸鈉 □組份濃度 3 M 醋酸鈉 （pH5.2） □配制量 100mL □配制方法 1. 稱取40.8gNaOAc•3H2O置于100～200mL燒杯中，加入約40mL的去離子水攪拌溶解。 2. 加入冰乙酸調節(jié)pH值至5.2。 3. 加入去離子水將溶液定容至100mL。 4. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。 5、PBS Buffer □組份濃度 137 mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4 □配制量 1L □配制方法 1. 稱量下列試劑，置于1L燒杯中。 NaCl 8 g KCl 0.2g Na2HPO4 1.42 g KH2PO4 0.27g 2. 向燒杯中加入約800 mL的去離子水，充分攪拌溶解。 3. 滴加HCl將pH值調節(jié)至7.4，然后加入去離子水將溶液定容至1L。 4. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。 注意：上述PBS Buffer中無二價陽離子，如需要，可在配方中補充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。 6、10 M醋酸銨 □組份濃度 10 M醋酸銨 □配制量 100mL □配制方法 1. 稱量77.1g醋酸銨置于100～200 mL燒杯中，加入約30 mL的去離子水攪拌溶解。 2.加去離子水將溶液定容至100mL。 3.使用0.22μm濾膜過濾除菌。 4.密封瓶口于室溫保存。 注意：醋酸銨受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。 7、Tris- HCl平衡苯酚 □配制方法 1. 使用原料：大多數(shù)市售液化苯酚是清亮無色的，無需重蒸餾便可用于分子生物學實驗。但有些液化苯酚呈粉紅色或黃色，應避免使用。同時也應避免使用結晶苯酚，結晶苯酚必須在160℃對其進行重蒸餾除去諸如醌等氧化產(chǎn)物，這些氧化產(chǎn)物可引起磷酸二酯鍵的斷裂或導致RNA和DNA的交聯(lián)等。因此，苯酚的質量對DNA、RNA的提取極為重要，我們推薦使用高質量的苯酚進行分子生物學實驗。 2. 操作注意：苯酚腐蝕性極強，并可引起嚴重灼傷，操作時應戴手套及防護鏡等。所有操作均應在通風櫥中進行，與苯酚接觸過的皮膚部位應用大量水清洗，并用肥皂和水洗滌，忌用乙醇。 3. 苯酚平衡：因為在酸性pH條件下DNA分配于有機相，因此使用苯酚前必須對苯酚進行平衡使其pH值達到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下： ① 液化苯酚應貯存于-20℃，此時的苯酚呈現(xiàn)結晶狀態(tài)。從冰柜中取出的苯酚首先在室溫下放置使其達到室溫，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。 ② 加入羥基喹啉（8-Quinolinol）至終濃度0.1％。該化合物是一種還原劑、RNA酶的不完全抑制劑及金屬離子的弱螯合劑，同時因其呈黃色。有助于方便識別有機相。 ③ 加入等體積的1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力攪拌器攪拌15分鐘，靜置使其充分分層后，除去上層水相。 ④ 重復操作步驟③。 ⑤ 加入等體積的0.1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力攪拌器攪拌15分鐘，靜置使其充分分層后，除去上層水相。 ⑥ 重復操作步驟⑤，稍微殘留部分上層水相。 ⑦ 使用pH試紙確認有機相的pH值大于7.8。 ⑧ 將苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。 8、苯酚/氯仿/異戊醇 □配制方法 1. 說明：從核酸樣品中除去蛋白質時常常使用苯/酚/氯仿/異戊醇（25：24：1）。氯仿可使蛋白（25 ：24 ：1） 質變性并有助于液相與有機相的分離，而異戊醇則有助于消除抽提過程中出現(xiàn)的氣泡。 2. 配制方法：將Tris-HCl平衡苯酚與等體積的氯仿/異戊醇（24：1）均勻混合后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。 9、10％（W/V）SDS □組份濃度 10％（W/V）SDS □配制量 100mL □配制方法 1.稱量10g高純度的SDS置于100～200mL燒杯中，加入約80mL的去離子水，68℃加熱溶解。 2. 滴加數(shù)滴濃鹽酸調節(jié)pH值至7.2。 3. 將溶液定容至100mL后，室溫保存。 10、2 N NaOH □組份濃度 2N NaOH □配制量 100mL □配制方法 1.量取80mL去離子水置于100～200mL塑料燒杯中（NaOH溶解過程中大量放熱，有可能使玻璃燒杯炸裂）。 2. 稱取8g NaOH小心地逐漸加入到燒杯中，邊加邊攪拌。 3. 待NaOH完全溶解后，用去離子水將溶液體積定容至100mL。 4. 將溶液轉移至塑料容器中后，室溫保存。 11、2.5 N HCl □組份濃度 2.5 N HCl □配制量 100mL □配制方法 1. 在78.4mL的去離子水中加入21.6mL的濃鹽酸（11.6N），均勻混合。 2. 室溫保存。 12、5 M NaCl □組份濃度 5 M NaCl □配制量 1L □配制方法 1. 稱取292.2g NaCl置于1L燒杯中，加入約800mL的去離子水后攪拌溶解。 2. 加去離子水將溶液定容至1L后，適量分成小份。 3. 高溫高壓滅菌后，4℃保存。 13、20％（W/V）Glucose □組份濃度 20％（W/V）Glucose □配制量 100mL □配制方法 1. 稱取20g Glucose置于100～200mL燒杯中，加入約80mL的去離子水后，攪拌溶解。 2. 加去離子水將溶液定容至100mL。 3. 高溫高壓滅菌后，4℃保存。 14、Solution I □組份濃度 25 mM Tris-HCl（pH8.0），10mM EDTA，50mM Glucose （質粒提取用） □配制量 1L □配制方法 1. 量取下列溶液，置于1L燒杯中。 1M Tris-HCl（pH8.0） 25mL 0.5 M EDTA（pH8.0） 20mL 20％Glucose（1.11M） 45mL dH2O 910mL 2. 高溫高壓滅菌后，4℃保存。 3. 使用前每50 mL的Soliution I中加入2mL的RNase A（20mg/mL）。 15、Solution II □組份濃度 250mM NaOH，1％（W/V）SDS （質粒提取用） □配制量 500mL □配制方法 1. 量取下列溶液置于500mL燒杯中。 10％SDS 50mL 2N NaOH 50mL 2. 加滅菌水定容至500mL，充分混勻。 3. 室溫保存。此溶液保存時間最好不要超過一個月。 注意：SDS易產(chǎn)生氣泡，不要劇烈攪拌。 16、Solution III □組份濃度 3M KOAc，5M CH3COOH （質粒提取用） □配制量 500mL □配制方法 1. 量取下列溶液置于500mL燒杯中。 KOAc 147g CH3COOH 57.5mL 2. 加入300mL去離子水后攪拌溶解。 3. 加去離子水將溶液定容至500mL。 4. 高溫高壓滅菌后，4℃保存。 17、0.5M EDTA □組份濃度 0.5 M EDTA (pH8.0) □配制量 1L □配制方法 1. 稱取186.1g Na2EDTA•2H2O，置于1L燒杯中。 2. 加入約800mL的去離子水，充分攪拌。 3. 用NaOH調節(jié)pH值值8.0（約20g NaOH）。 注意：pH值至8.0時，EDTA才能完全溶解。 4. 加去離子水將溶液定容至1L。 5. 適量分成小份后，高溫高壓滅菌。 6. 室溫保存。 18、1 M DTT □組份濃度 1 M DTT □配制量 20mL □配制方法 1. 稱取3.09g DTT，加入到50mL塑料離心管內。 2. 加20mL的0.01 M 的NaOAc（pH5.2），溶解后使用0.22μm濾器過濾除菌。 3. 適量分成小份后，-20℃保存。 19、10mM ATP □組份濃度 10mM ATP □配制量 20mL □配制方法 1. 稱取121mg Na2ATP•3H2O，加入到50mL塑料離心管內。 2. 加20mL的25mM Tris-HCl（pH8.0），攪拌溶解。 3. 適量分成小份，-20℃保存 [ Last edited by silicare on 2014-2-18 at 17:21 ] |
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