 |
 |
 |
| 24小時(shí)熱門(mén)版塊排行榜 |
- >論壇更新日志 (561)
- >考研 (90)
- >導(dǎo)師招生 (41)
- >蟲(chóng)友互識(shí) (22)
- >考博 (14)
- >論文投稿 (14)
- >文獻(xiàn)求助 (8)
- >碩博家園 (5)
- >博后之家 (4)
- >找工作 (3)
- >留學(xué)生活 (2)
- >論文道賀祈福 (2)
- >職場(chǎng)人生 (1)
- >海外博后 (1)
- >招聘信息布告欄 (1)
- >留學(xué)DIY (1)
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 6 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3057 | 回復(fù): 5 | |||
shaojing690新蟲(chóng) (初入文壇)
|
[交流]
【分享】SDS-PAGE電泳原理及蛋白質(zhì)定量測(cè)定 已有5人參與
|
|
SDS-PAGE電泳原理及蛋白質(zhì)定量測(cè)定(2008-10-23 16:04:31) 一、原理： 聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺 (簡(jiǎn)稱Acr) 和交聯(lián)劑N，N’—亞甲基雙丙烯酰胺（簡(jiǎn)稱Bis）在催化劑作用下，聚合交聯(lián)而成的具有網(wǎng)狀立體結(jié)構(gòu)的凝膠，并以此為支持物進(jìn)行電泳。聚丙烯酰胺凝膠電泳可根據(jù)不同蛋白質(zhì)分子所帶電荷的差異及分子大小的不同所產(chǎn)生的不同遷移率將蛋白質(zhì)分離成若干條區(qū)帶，如果分離純化的樣品中只含有同一種蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)樣品電泳后，就應(yīng)只分離出一條區(qū)帶。 SDS是一種陰離子表面活性劑能打斷蛋白質(zhì)的氫鍵和疏水鍵，并按一定的比例和蛋白質(zhì)分子結(jié)合成復(fù)合物，使蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷的量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)其本身原有的電荷，掩蓋了各種蛋白分子間天然的電荷差異。因此，各種蛋白質(zhì)-SDS 復(fù)合物在電泳時(shí)的遷移率，不再受原有電荷和分子形狀的影響，而只是棒長(zhǎng)的函數(shù)。這種電泳方法稱為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（簡(jiǎn)稱SDS—PAGE）。由于SDS-PAGE 可設(shè)法將電泳時(shí)蛋白質(zhì)電荷差異這一因素除去或減小到可以略而不計(jì)的程度，因此常用來(lái)鑒定蛋白質(zhì)分離樣品的純化程度，如果被鑒定的蛋白質(zhì)樣品很純，只含有一種具三級(jí)結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)或含有相同分子量亞基的具四級(jí)結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)，那么SDS—PAGE 后，就只出現(xiàn)一條蛋白質(zhì)區(qū)帶。 SDS—PAGE 可分為圓盤(pán)狀和垂直板狀、連續(xù)系統(tǒng)和不連續(xù)系統(tǒng)。本實(shí)驗(yàn)采用垂直板狀不連續(xù)系統(tǒng)。所謂“不連續(xù)”是指電泳體系由兩種或兩種以上的緩沖液、pH 和凝膠孔徑等所組成。 1.蛋白樣品濃縮效應(yīng) 在不連續(xù)電泳系統(tǒng)中，含有上、下槽緩沖液(Tris—Gly，pH8.3)、濃縮膠緩沖液(Tris—HCl，pH6.8)、分離膠緩沖液(Tris—HCl，pH8.8)，兩種凝膠的濃度(即孔徑)也不相同。在這種條件下，緩沖系統(tǒng)中的HCl 幾乎全部解離成Cl－，兩槽中的Gly (pI＝6.0，pK a=9.7)只有很少部分解離成Gly 的負(fù)離子，而酸性蛋白質(zhì)也可解離出負(fù)離子。這些離子在電泳時(shí)都向正極移動(dòng)。C1—速度最快(先導(dǎo)離子)，其次為蛋白質(zhì)，Gly 負(fù)離子最慢(尾隨離子)。由于C1—很快超過(guò)蛋白離子，因此在其后面形成一個(gè)電導(dǎo)較低、電位梯度較陡的區(qū)域，該區(qū)電位梯度最高，這是在電泳過(guò)程中形成的電位梯度的不連續(xù)性，導(dǎo)致蛋白質(zhì)和Gly 離子加快移動(dòng)，結(jié)果使蛋白質(zhì)在進(jìn)入分離膠之前，快、慢離子之間濃縮成一薄層，有利于提高電泳的分辨率。 2.分子篩效應(yīng) 蛋白質(zhì)離子進(jìn)入分離膠后，條件有很大變化。由于其pH 升高(電泳進(jìn)行時(shí)常超過(guò)9.0)，使Gly 解 離成負(fù)離子的效應(yīng)增加；同時(shí)因凝膠的濃度升高，蛋白質(zhì)的泳動(dòng)受到影響，遷移率急劇下降。此兩項(xiàng)變化，使Gly 的移動(dòng)超過(guò)蛋白質(zhì)，上述的高電壓梯度不復(fù)存在，蛋白質(zhì)便在一個(gè)較均一的pH 和電壓梯度環(huán)境中，按其分子的大小移動(dòng)。分離膠的孔徑有一定的大小，對(duì)不同相對(duì)分子質(zhì)量的蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)，通過(guò)時(shí)受到的阻滯程度不同，即使凈電荷相等的顆粒，也會(huì)由于這種分子篩的效應(yīng)，把不同大小的蛋白質(zhì)相互分開(kāi)。 二，定量注意事項(xiàng) 1. 用SDS-PAGE測(cè)定蛋白質(zhì)相對(duì)分子量時(shí)，必須同時(shí)作標(biāo)準(zhǔn)曲線。而且每次都要同時(shí)用作標(biāo)準(zhǔn)曲線，現(xiàn)做現(xiàn)用，不可相互挪用。SDS-PAGE測(cè)定分子量有10％誤差，不可完全信任。 2. SDS與蛋白質(zhì)的結(jié)合成比例（即：1.4gSDS /g蛋白質(zhì)），蛋白質(zhì)含量不可過(guò)量，否則SDS結(jié)合量不足，會(huì)使測(cè)量結(jié)果出現(xiàn)偏差。 4. 有的蛋白質(zhì)（如：電荷異�；蚪Y(jié)構(gòu)異常的蛋白質(zhì)；帶有較大輔基的蛋白質(zhì)）不能采用該法測(cè)相對(duì)分子量。 5. 如果該電泳中出現(xiàn)拖尾、染色帶的背景不清晰等現(xiàn)象，可能是SDS不純引起 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有209人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽(yáng)學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
湖北師范大學(xué)招調(diào)劑啦
已經(jīng)有3人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 【分享】實(shí)驗(yàn)室常用溶液的配制
已經(jīng)有34人回復(fù)
ashark
木蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 3067.8
- 帖子: 28
- 在線: 19.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 567392
- 注冊(cè): 2008-06-01
- 專業(yè): 抗炎與免疫藥物藥理
2樓2010-07-23 10:59:56
hangnan
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 12.5
- 帖子: 19
- 在線: 1.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 995653
- 注冊(cè): 2010-04-13
3樓2010-07-28 00:42:07
4樓2012-09-28 11:26:21
耀曜512
銀蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1375.5
- 帖子: 43
- 在線: 15.7小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 3239137
- 注冊(cè): 2014-05-25
- 專業(yè): 碳素材料與超硬材料
5樓2014-10-14 14:44:20
6樓2016-02-28 21:45:47
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 shaojing690 的主題更新
| 6 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿食品科學(xué)與工程083200求調(diào)劑 +3 | XQTJZ 2026-03-30 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 08工科求調(diào)劑286 +4 | tgs_001 2026-03-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 346求調(diào)劑 一志愿070303有機(jī)化學(xué) +7 | 蘿卜燉青菜 2026-03-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研]
 304材料求調(diào)劑
+5
|
鐘llll 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 化工專碩求調(diào)劑 +5 | question挽風(fēng) 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +7 | 青春裁為三截 2026-03-29 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料與化工272求調(diào)劑 +21 | 阿斯蒂芬2004 2026-03-28 | 21/1050 |
|
|
|
[考研] 375求調(diào)劑 +6 | 雨夏整夜 2026-03-29 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 本科雙非材料，跨考一志愿華電085801電氣，283求調(diào)劑，任何專業(yè)都可以 +6 | 芝士雪baoo 2026-03-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 322求調(diào)劑 +5 | 舊吢 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 292求調(diào)劑 +14 | 鵝鵝鵝額額額額?/a> 2026-03-25 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +10 | jjjjjjjjjjl 2026-03-27 | 10/500 |
|
|
|
[有機(jī)交流]
高溫高壓反應(yīng)求助
 10+4
|
chibby 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +11 | 陽(yáng)陽(yáng)哇塞 2026-03-27 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 272求調(diào)劑 +7 | 腳滑的守法公民 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 274求調(diào)劑 +17 | 顧九笙要謙虛 2026-03-24 | 23/1150 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑推薦 +5 | 清酒714 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +3 | 崔wj 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +4 | 13853210211 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
材料考研調(diào)劑生
+3
|
黃粱一夢(mèng)千年 2026-03-24 | 3/150 |
|