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xucan0901銅蟲 (初入文壇)
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[交流]
【求助/交流】電轉(zhuǎn)化問題 已有2人參與
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我做電轉(zhuǎn)化時(shí)，為何轉(zhuǎn)提取的純質(zhì)粒時(shí)，即使稀釋1000倍也長很多菌落。 但是當(dāng)轉(zhuǎn)化連接產(chǎn)物時(shí)，就一個(gè)菌落也不長了，我重復(fù)了幾次都是這樣。后來師兄 說要把連接產(chǎn)物過柱純化，但是我做了也是不長，不知道為何？請(qǐng)教高手! |
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lwiaanngg
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4樓2010-07-24 09:00:04
lwiaanngg
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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
reasonspare(金幣+2):謝謝分享。 2010-07-24 06:19:06
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純質(zhì)粒和連接產(chǎn)物在轉(zhuǎn)化中是有不同的。例如，純質(zhì)粒在轉(zhuǎn)化中完全可以不搖菌的。 你換個(gè)角度來思考問題，大概算算你純質(zhì)粒和連接產(chǎn)物中各有多少質(zhì)粒分子了： 你可以都以100ng來算一下有多少分子了。你的連接效率好的情況下，也就1/1000了。自然你就理解為什么連接產(chǎn)物效率下降了。 連接產(chǎn)物如果轉(zhuǎn)不出來，大多數(shù)情況下是連接自身的問題。也就是說，沒有連接上，或者說連上的量太少。檢查一下你的酶切等連接前的過程和你的連接酶是否正常 |
2樓2010-07-24 00:19:34
xucan0901
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3樓2010-07-24 08:56:25
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