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guangxidaxue金蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助畢赤酵母電轉化問題
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酵母是GS115,載體pPIC9K,構建成功后有11KB。SacI線性化。 電轉化步驟:調但菌落培養(yǎng)過夜,然后轉接100ML YPD培養(yǎng)基中,OD600約1.1~1.5時收集細胞,4度離心,冰水洗二次,1M山梨醇洗一次,最后用1ML山梨醇溶,取80UL與5-10ugDNA混溶,轉入0.2cm預冷電轉杯中,冰浴5min!1.5kv,25μF,200Ω條件下進行電轉,立即加1ML 1M山梨醇,然后涂MD板! 在以上的條件下做了好幾次了都沒有長,求各位高手大俠幫幫忙!指點下。。。萬分感謝! |
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